INVESTIGADORES
ROMANINI Diana
congresos y reuniones científicas
Título:
EFECTO DE VARIABLES EXPERIMENTALES QUE CONDICIONAN LA SOLUBILIDAD DE COMPLEJOS PROTEÍNA-POLIELECTROLITOS EN PRESENCIA DE DISTINTOS ANIONES. SU APLICACIÓN A LA BIOSEPARACIÓN
Autor/es:
MANZUR, ALEJANDRA; ROMANINI, DIANA; PICÓ, GUILLERMO
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; VIII-Congreso. XXVI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario, 2006.; 2006
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario
Resumen:
EFECTO DE VARIABLES EXPERIMENTALES QUE CONDICIONAN LA SOLUBILIDAD DE COMPLEJOS PROTEÍNAPOLIELECTROLITOS EN PRESENCIA DE DISTINTOS ANIONES. SU APLICACIÓN A LA BIOSEPARACIÓN. Alejandra Manzur, Diana Romanini y Guillermo Picó.Área Fisicoquímica. Departamento de Química-Física Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. U.N.R.             En la actualidad, el empleo de polímeros de cadena flexible (PCF) está muy difundido en procedimientos de aislamiento y purificación de macromoléculas en general. Los PCF que poseen carga eléctrica neta, denominados comúnmente polielectrolitos (PE), forman complejos con las proteínas, los cuales pueden volverse insolubles, pudiendo separarse del resto del medio por simple decantación. Este proceso depende de una serie de variables experimentales tales como: diferente densidad de carga eléctrica y peso molecular del PE, pH, presencia de aniones polivalentes, fuerza iónica, concentración del PE, mezcla de PEs de diferentes carga eléctrica, etc. Esta propiedad que poseen los PE es la base de un método de aislamiento y purificación de proteínas. Para que el proceso sea efectivo, se debe lograr que la proteína pueda ser recuperada del complejo insoluble. Este proyecto tuvo como objetivo caracterizar el mecanismo molecular de formación del complejos proteínas-polielectrolitos  como punto de partida para aislar proteínas de importancia comercial contenidas en productos naturales  y obtener el diagrama de solubilidad del polielectrolito polietilenimina (PEI) en presencia de distintos aniones: fosfato y citrato. La técnica empleada para analizar el efecto de la concentración del polímero, aniones, cloruro de sodio, temperatura y pH, sobre la precipitación del complejo polímero-proteína, fue la medición de absorbancia del medio a 420 nm (turbidez). Se realizaron gráficos de turbidez vs. pH para distintas concentraciones (%p/p) de PEI, de los cuales se obtuvieron los correspondientes diagramas de fase los cuales mostraron turbidez en el rango de pH 4-7. Se estudió también el efecto de distintas sales de sodio, el efecto de la fuerza iónica y la turbidez del sistema para cada uno de los aniones ensayados: fosfato y citrato. La turbidez del complejo obtenida en presencia de los dos aniones fue diferente y , en ambos casos muy dependiente de la fuerza iónica del medio. Las mejores condiciones experimentales se obtuvieron en presencia del anión fosfato, en ausencia de sales y a pH 5,5. Dicho anión produce una precipitación más eficiente que el citrato. Se procedió a la precipitación de diferentes proteínas modelo (albúmina sérica bovina, lisozima y pepsina), que al pH de trabajo (5,5), poseen diferente carga eléctrica neta. El porcentaje precipitado de cada una de ellas fue: 0, 9,1 y 44,6 % respectivamente. La determinación de la concentración de proteína previa y posterior a la precipitación se midió espectrofotométricamente a 280nm. Una adecuada descripción empírica de estos sistemas permitirían aplicar esta técnica para extractos naturales