Establecimiento in vitro de segmentos nodales de Pinus elliottii var. elliottii x Pinus caribaea var. hondurensis

FORTES N.; LUNA C,; SANSBERRO P.

Resistencia-Chaco

Jornada; Actas de la Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas. SECYT, UNNE; 2009

SECYT

Con el propósito de lograr el establecimiento in vitro de brotes de Pinus elliottii var. elliottii x Pinus caribaea var. hondurensis, segmentos de macroblastos conteniendo 2-3 braquiblastos, fueron previamente acondicionados y sumergidos en una solución de etanol (70º) durante 1 min. y transferidos ya sea a una solución acuosa de hipoclorito de sodio (1,37 - 1,65 y 2,2 %), peróxido de hidrógeno (0,25 – 0,5 – 1 y 1,5 %) o bien, peróxido de calcio (0,5 – 1 y 1,5%) durante 30 min. Finalmente estos fueron enjuagados varias veces con agua destilada estéril. Posteriormente, los explantes fueron cultivados (1 explante por recipiente) en tubos de 17 cc que contenían 4 ml del medio basal de Murashige y Skoog (1962), semisólido (agar Sigma A-1296, 6.5 gr L-1), adicionado con 3% de sacarosa. El pH del medio fue ajustado a 5.8 con KOH y/o HCl antes de la adición del agente gelificante. Los cultivos fueron incubados en condiciones de luz y temperatura controlada. Transcurridos 15 días del pretratamiento, basado en un análisis cuantitativo y cualitativo, se seleccionó como solución desinfectante el peróxido de hidrógeno, descartándose el empleo del NaOCl y del CaO2 ya que manifestaron síntomas de fitotoxicidad y una baja efectividad en el control de hongos contaminantes, respectivamente. En una segunda etapa, a fin de establecer una dosis adecuada del H2O2, empleándose un pretratamiento similar al anterior, los explantes fueron sumergidos en distintas dosis del producto (15, 25, 35 y 50%) durante 40 min. Luego de 15 días de incubación, el establecimiento in vitro de los explantes varió entre un 20 y 100% dependiendo de la concentración empleada. Los mejores resultados se obtuvieron cuando los explantes fueron tratados con una solución de H2O2 al 25%, en donde 83 ± 8,8 % de los mismos brotaron activamente sin evidenciar síntomas de fitotoxicidad y/o ennegrecimiento tisular. En contraposición, al incrementar la concentración por encima de la dosis ideal, el establecimiento disminuyó debido principalmente a efectos deletéreos sobre el tejido ocasionando severos daños oxidativos (ennegrecimiento). En conclusión, los resultados demuestran que el uso de H2O2, a una concentración del 25%, permite un exitoso establecimiento in vitro del material vegetal sin evidenciar síntomas de fitotoxicidad.