Caracterización de aislamientos clínicos argentinos de Clostridium difficile: ensayos de susceptibilidad y esporulación frente a agentes antimicrobianos

JULIETA DICRISCIO; JESSICA MINAARD; FERNANDO M. TREJO; PABLO F. PÉREZ

CABA

Congreso; VIII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica (SADEBAC); 2018

Introducción y objetivos. Clostridium difficile es un bacilo gram positivo patógenoesporulado cuya infección en humanos se asocia al uso de antibióticos y su formade diseminación es el esporo. La interacción del microorganismo conantimicrobianos y el ciclo de esporulación son elementos clave para comprenderlos casos de recurrencia El objetivo del presente trabajo es estudiar el efectode antimicrobianos sobre aislamientos de C.difficile en cuanto a la susceptibilidad y el ciclo de esporulación.  Materiales y métodos. Se estudiaron dos aislamientos clínicos de C. difficile (ALCD3 y 117) y la cepa de referencia VPI10463. Pordilución en caldo (DC), siguiendo las normas del Clinical and Laboratory Standars Institute (CLSI), se evaluó la susceptibilidaddeterminando la concentración inhibitoria mínima (CIM) frente a Metronidazol(MTZ), Vancomicina (VAN), Clindamicina (CLI), Piperacilina-Tazobactam(PIP-TAZ), Cloranfenicol (CLF), Moxifloxacina (MXF)y una bacteriocina, la Nisina (NIS). Sobre los tubos sin desarrollo al evaluarla CIM, se realizó una siembra en agar BHI suplementado con carbón activado paradiferenciar bacteriostasis (BS) de bactericidia (BC). Mediante microscopia decontraste de fases se evaluó la capacidad de C. difficile de esporular en presencia de concentracionessub-inhibitorias de CLI (2 µg/ml). Se registraron lasproporciones de bacilos (B) y de esporos en diferentes fases: oscura (Eo), brillante (Eb) y libre (L).Resultados. Lastres cepas mostraron una CIM de 2µg/ml frente a MTZ y VAN,  y de 4µg/ml para PIP-TAZ. Frente a CLI, la cepa 117 presentó CIM=16µg/ml mientras que VPI 10463 yALCD3 mostraron CIM=8 µg/ml. Frente a CLFla CIM fue de 8µg/ml para las tres cepas. La NIS produjo inhibición del crecimiento de las cepas VPI 10463 yALCD3 a partir de 4µg/ml y para la cepa 117 a partir de 128 µg/ml. Las cepasVPI 10463 y 117 resultaron inhibidas con 2µg/ml de MXF y la cepa ALCD3 lo fue a 16µg/ml. A partir de estos resultados,se obtuvieron las concentraciones BC que se muestran en la siguiente tabla   Antibiótico BC(µg/ml) ALCD3 VPI 10463 117 MTZ 2 2 2 VAN 2 2 2 PIP-TAZ 4 4 4 CLI 8 16 16 CLF 8 16 16 NIS 4 4 128 MXF 32 4 4  La MXF fue BS a 16µg/ml para ALCD3 y a 2 µg/ml paraVPI10463 y 117; CLF lo fue a 16µg/ml para VPI10463 y 117. CLI resultó BS paraVI10463 a 16µg/ml. En presencia o no de CLI (2 µg/ml) las proporciones de esporos aumentaronen el tiempo, con máximos de Eb al día 7 en las 3 cepas. Para las cepas ALCD3 y117 crecidas en presencia de CLI hubo un menor incremento de L respecto alcontrol crecido sin CLI.