Incremento en la acumulación de transglutaminasa tisular humana en células vegetales a través de la coexpresión con un anticuerpo simple cadena-fusionado a un polímero similar a elastina

MARIN VIEGAS, VANESA SOLEDAD; PETRUCCELLI, SILVANA

Mar del Plata

Congreso; XV Congreso Latinoamericano de Fisiología Vegetal ? XXX Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2014

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

La transglutaminasa tisular humana (htTG) es una proteína de interés para el diagnóstico de la enfermedad celíaca y resulta altamente tóxica en varios sistemas de expresión por lo que se acumula en niveles bajos lo que dificulta también su purificación. En este trabajo a fin de sortear las dificultades en la síntesis y recuperación se evaluó la estrategia de coexpresar htTG y un anticuerpo simple cadena scFv específico de htTG fusionado a polímeros similares a elastina (ELP). La hipótesis planteada fue que la interacción de scFv-ELP con htTG la protegería de la degradación. A fin de evaluar esta hipótesis se generó una fusión del scFv-2G3 a un ELP formado por 36 unidades del pentapéptido VPGXG, donde X es un aminoácido hidrofóbico. Este ELP fue diseñado de forma que sea insoluble en las condiciones de crecimiento de las plantas. A fin de poder evaluar los cambios in vivo se emplearon fusiones RFP-htTG y RFP-ELP. Se efectuaron ensayos de expresión temporal en hojas de Nicotiana benthamiana y el efecto en la acumulación de htTG se evaluó por microscopía confocal y por inmunoblot. Al expresar únicamente RFP-htTG se observa la típica estructura del retículo endoplásmico (ER) y RFP-htTG da un banda muy tenue por inmunoblot. Al expresar RFP-ELP se observa la formación de cuerpos proteicos (PB) dentro del ER. Al co-expresar RFP-htTG y scFv-ELP se observa que htTG se integra a los PBs. Además, se detecta una redistribución de las estructuras que forma htTG ubicándolas en localizaciones más puntuales, concentradas en la zona del núcleo y bordes de la célula. El análisis por inmunoblot muestra que htTG se acumula en mayores niveles en presencia del scFv-ELP por lo que se confirma que esta estrategia podría utilizarse como método de estabilización