"Purificación y caracterización de macrodontina, fitoproteasa de Pseudoananas macrodontes (Morr.) Harms., Bromelaceae”

CLAUDIA L. NATALUCCI, LAURA M. I. LÓPEZ, ADRIANA BRULLO, CYNTHIA SEQUEIROS, CARLOS LLERENA SUSTER, SEBASTIÁN TREJO Y NÉSTOR O. CAFFINI

Villa Giardino

Congreso; XXXII Reunión Anual de SAIB; 1997

SAIB

A partir de frutos semimaduros de “ihvirᔠ[Pseudoanans macrodontes (Morr.) Harms] se ha aislado, purificado y caracterizado una fitoproteasa cisteínica. La actividad protelítica del extracto crudo (obtenido por trituración de los frutos en buffer fosfatos  pH 6, con el agregado de EDTA 5 mM y cisteína 12,5 mM) se mantiene estable al menos luego de dos horas  de incubación a los valores de pH de máxima actividad (7,0 -10,0). El análisis del extracto crudo por isoelectroenfoque muestra la presencia de siete fracciones proteicas, de las cuales sólo dos (pI 5,9 y 6,1) son activas. En base a esta información se recurrió a la cromatografía de intercambio aniónico (DEAE-Sepharose FF, buffer Tris-HCl de pH 7,9; eluyendo con un gradiente de cloruro de sodio 0,05 a 0,2M), como estrategia de purificación que permitió la separación de las fracciones activas junto a péptidos de menor peso molecular (Sephadex G-75). Las fracciones activas exhiben pesos moleculares de 25 kDa y 26,9 kDa (SDS-PAGE 12,5%). El análisis del extremo N-terminl de la fracción activa  principal revela un 85,7 % de homología con bromelina, en tanto que en la secuencia completa la homología alcanza el 64,4 % (134 sobre 208 aminoácidos). Esta fracción es de naturaleza glicoproteica.