"Aislamiento y Producción de Proteasas de la cepa hidrocarburolítica Vibrio harvey 80"

OLIVERA, N. Y SEQUEIROS, C.

Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología Molecular y Biología Celular

Congreso; Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología Molecular y Biología Celular; 2000

Los microorganismos de ambientes expuestos a condiciones altamente selectivas, como los que crecen  en piletas de depósito de residuos hidrocarburados (Puerto Madryn, Chubut), pueden constituir una fuente de enzimas con nuevas propiedades. De este ambiente se aislaron y caracterizaron 18 cepas bacterianas. Cuatro cepas demostraron capacidad de licuar gelatina, sugiriendo producción de proteasas. Estos microorganismos se cultivaron en medios con caseína o gelatina, y se determinó la actividad caseinolítica en los sobrenadantes. La cepa que presentó mayor actividad en estas condiciones, Vibrio harveyi 80, fue seleccionada para analizar la producción de proteasas extracelulares y asociadas a las células, en distintos medios de cultivo (Luria Bertani -LB-, Casoy, Gelatina, y medio agua de mar e hidrocarburos). En este último caso, los pellets se incubaron en buffer 0,1 M Tris-HCl 1mM EDTA (pH 7,5), se centrifugó y se determinó actividad en la fase acuosa. El sobrenadante con mayor actividad caseinolítica (proteasas extracelulares), fue el obtenido en el medio LB, seguido por los medios gelatina e hidrocarburos. En los extractos provenientes de los pellets, la mayor actividad se registró en el medio con hidrocarburos, luego en los medios gelatina y Casoy. En estos extractos se observó una menor actividad específica, sugiriendo la presencia de proteínas no activas; por tal motivo se está optimizando el aislamiento y purificación parcial de estas fracciones.