“Búsqueda de nuevas fitoproteasas en especies patagónicas”

SEQUEIROS, C., LÓPEZ, L. M. I., MATTIO N., CAFFINI, N. O. Y NATALUCCI, C. L.

Viña del Mar, Chile

Congreso; Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología Molecular y Biología Celular,; 2000

SAIB

Se estudió el látex de las siguientes especies: Colliguaja integerrima Gill. et Hook., Euphorbia collina Philippi, Euphorbia peplus L., Stillingia patagonica (Speg.) Pax et Hoffmann (Euphorbiaceae), Philibertia gilliesii Hook. et Arn. (Asclepiadaceae) y Grindelia chiloensis (Corn.) Cabrera (Asteraceae). El látex se recogió sobre buffer Tris-HCl 0,1M de pH 7,5 conteniendo EDTA 5mM y se centrifugó durante 60 min a 40.000 RCF. Los extractos de Philibertia gilliesii y Stillingia patagónica mostraron elevada actividad específica caseinolítica, siendo ésta escasa en los de Euphorbia collina y no detectable en los demás extractos. El perfil proteico de cada extracto fue analizado por SDS-PAGE e IEF-zimograma. La especie más promisoria fue Philibertia gilliesii. El IEF-zimograma revela la presencia de 7 fracciones, de las cuales tres son proteolíticamente activas: dos de pI > 9,3 y una de pI = 9,2. El perfil de pH (buffers de Good 25mM) muestra máxima actividad caseinolítica en el rango de pH 7-8. La enzima retiene un 80% de la actividad máxima luego de 2 h a 45 °C, la actividad residual es del 50% luego de 30 min a 55 oC y se inactiva totalmente al cabo de 5 min a 75 oC. El extracto crudo resiste altas concentraciones salinas: retiene el 60% de la actividad inicial en NaCl 0,7 M y es inhibido en un 55% con E-64 y en un 12% con ácido iodoacético.