“Philibertaina I: una endopeptidasa cisteínica del latex de Philibertia gilliesii, una especie Patagonica”

C. SEQUEIROS; M.J. TORRES, M. FERNÁNDEZ TAYELDÍN, S.A. TREJO, C.L. NATALUCCI, F.X. AVILÉS Y L.M.I. LÓPEZ

Havana International Conference Center, Cuba.

Simposio; II International Symposium On Biochemistry And Molecular Biology; 2004

A partir del látex de Philibertia gilliesii Hook. et Arn. (Asclepiadaceae) fue obtenida en la primera etapa de purificación una preparación parcialmente purificada denominada philibertaína. Dicha preparación retuvo el 90% de la actividad proteolítica inicial y el 73% de las proteínas. Por isoelectroenfoque seguido de zimograma se observó la presencia de siete fracciones proteicas de distinto pI, de las cuales al menos cinco muestran actividad proteolítica en el zimograma: una fracción de pI 8,8, otra de pI 9,7 y una tercera de pI > 10,25. Teniendo en cuenta los valores de punto isoeléctrico de los componentes proteolíticos (> 8,8), el extracto crudo fue purificado por FPLC empleando un intercambiador catiónico de alta resolución (SP-Sepharose HR). Variando los valores de pH y los gradientes salinos pudieron separarse cuatro fracciones proteicas con actividad proteolítica. El perfil de la segunda fracción muestra la presencia de más de un pico proteico, mientras que la tercera permite distinguir claramente dos picos activos. La fracción activa más básica, a la que denominamos philibertaína I fue homogénea por isoelectroenfoque, SDS-PAGE y espectrometría de masas (MALDI-TOF). La secuencia N-terminal de philibertaína I (LPASVDWRKEGAVLPIRHQGQCG) posee entre un 73,9 y un 61% de identidad con quince peptidasas cisteínicas de origen vegetal y el valor de su Mr es de 23.530 Da determinado por espectrometría de masas. Actualmente se está trabajando en la obtención de su cDNA para su posterior secuenciamiento.