Carragenanos como agente antiviral contra BHV-1 y PRV-1

JESICA DIOGO; MARCELO GONZALEZ; ANA BRATANICH; MARINA CIANCIA

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virología-Asociación Argentina de Microbiología

El objetivo de este trabajo fue evaluar la sensibilidad de patógenos virales de interés veterinario en presencia de carragenano λ (C-λ). Para ello se utilizaron virus de la subfamilia alfa-Herpesviridae, la cepa Cooper de BHV-1 (Herpes virus bovino tipo 1) y la cepa Bartha de PRV-1 (Pseudorabia porcina tipo 1). Los carragenanos son polisacáridos sulfatados biosintetizados en grandes cantidades por algas rojas marinas. Tienen importantes aplicaciones en diversas industrias, como la alimentaria y cosmética, debido a sus interesantes propiedades físicas en soluciones acuosas. En particular, los carragenanos λ actúan como espesantes cuando se disuelven en agua, aún en muy bajas concentraciones. C-λ se extrajo con agua a temperatura ambiente de tetraesporofitos del alga roja Gigartina skottsbergii (Gigartinaceae, Rhodophyta), abundante en las costas patagónicas y usada para la producción comercial de carragenanos. Se determinó que tiene un alto contenido de sulfato (relación molar galactosa:3,6-anhidrogalactosa:sulfato, 1,00:0,06:1,77) y está constituido mayoritariamente por unidades alternantes de β-d-galactopiranosa enlazadas por C-3 y sulfatadas en C-2 y α-d-galactopiranosa enlazadas por C-4 y sulfatadas en C-2 y C-6. En primera instancia, se evaluó el efecto citotóxico de C-λ a concentraciones de 250, 500 y 1000 µg/ml sobre monocapas confluentes de células MDBK, mediante el método de exclusión con Azul Tripán. Luego, se procedió a la evaluación del efecto anti-viral del compuesto. La inoculación viral se realizó sobre monocapas confluentes de la línea celular MDBK en simultáneo con distintas concentraciones de C-λ (0, 10, 25, 50, 250, 500 y 1000 µg/ml). Luego de una hora de incubación a 37ºC, los inóculos fueron retirados y las monocapas se cubrieron con metilcelulosa al 1,5% durante 48 Hs ( BHV-1 Cooper y PRV-1 Batha) y 72 Hs (PRV-1 Bartha) a la misma temperatura. Finalmente, se llevó a cabo la fijación y la tinción de las mismas y se calculó el título viral en UFP/ml. Se realizaron al menos dos experimentos con múltiples determinaciones para cada concentración. Los resultados obtenidos no indicaron un efecto citotóxico de C-λ en la línea celular de trabajo. En presencia de C-λ se observó un importante efecto antiviral para ambas cepas como lo sugiere la importante reducción de UFP/ml aún en concentraciones muy bajas. Para la cepa BHV-1, se observó una reducción del 28% a una concentración de 10 µg/ml de C-λ y del 70% a 25 µg/ml. Para PRV-Bartha, a concentraciones de 10 µg/ml de C-λ se observó una reducción del 96% a las 48 Hs y del 85% a las 72 Hs de incubación. En todos los casos, la comparación se hizo con el control infectado con la misma carga viral pero en ausencia del C-λ. Estos resultados sugieren, tal como se ha observado con herpes virus humanos, que C-λ es efectivo como agente antiviral con BHV-1 y PRV-1, importantes patógenos animales. Asimismo, nuestros datos también demuestran una notable diferencia de sensibilidad al C-λ entre BHV-1 y PRV-1.