Estudios de biosimilaridad de Anticuerpo monoclonal

MARIA PIA VALACCO; SILVIA MORENO DE COLONNA; RICARDO MARTIN NEME TAUIL; JORGE GERMÁN FERNÁNDEZ

2016-01-01

2016-12-01

Salud humana

Se ha podido avanzar con un 85% del proyecto, que incluye determinaciónde masa molecular intacta, y mapeo peptídico por MS y MSMS de la proteína deglicosilada y glicosilada. Para el mapeo peptídico, que pretende cubrir la mayor parte de la secuencia por MS y MSMS, se realizaron digestiones enzimáticas de la molécula con varias proteasas de sitio de corte específico (Tripsina, corta a la derecha de lisina y argininas; Quimotripsina, corta a la derecha de triptofano, metionina, fenilalanina, tirosina, leucina; Gluc-c, corta a la derecha deglutámico) y análisis de los fragmentos proteolíticos por MS y MSMS con nanoHPLC, acoplada a Q Exactive para lograr cobertura total de la secuencia con los péptidos identificados. Se logró una cobertura de aproximadamente un 100% por MS y 95% por MSMS. También se realizaron digestiones con las mismas enzimas, de la molécula glicosilada, para luego identificar sitios de glicosilación y poder identificar la composición de los diferentes glicanos unidos. Se pudo finalizar la construcción de la base de datos de glicanos, para poder realizar la búsqueda automática de los mismos, con el software Proteome Discoverer. Se identificaron sitios de glicosilación, que además pudieron ser verificados con métodos manuales que pudimos poner a punto.