Identificación por espectrometría de masa de proteínas diferenciales en dos cepas mutantes de P. aeruginosa, DalgT y mucA22

FERNÁNDEZ, JORGE GERMÁN

2021-12-01

2022-12-01

Salud humana

Pseudomonas aeruginosa es un patógeno oportunista que infecta crónicamente las vías aéreas de pacientes con fibrosis quística. El fenotipo Mucoide, mutante de mucA, marca el inicio de una infección crónica y constituye un signo de mal pronóstico. El gen mucA de Pseudomonas aeruginosa regula negativamente la producción de alginato secuestrando la proteína algT, factor responsable de la transcripción del operón biosintético del alginato.Una de las mutaciones más frecuentes es la denominada mucA22. Se sabe que esta mutación produce grandes cambios en la bacteria, entre ellos una alta sensibilidad a los nitratos, no siendo viable si adicionalmente se la expone a condiciones anaeróbicas.También está demostrado que la deleción del gen algT, en el fenotipo mucA22, restaura la sensibilidad a los nitratos a casi los mismos niveles de la bacteria wild-type. Con el objetivo de dilucidar qué cambios se producen en el metabolismo del nitrógeno y en el metabolismo anaeróbico de P aeruginosa se decidió estudiar, por proteómica diferencial, estas dos mutaciones (mucA22 y algT) comparándolas contra la bacteria wild type, en condiciones anaeróbicas en presencia de nitrato (control) y de nitrato-nitrito (tratamiento).Para identificar una mayor cantidad de proteínas se dividió la muestra en tres fracciones subcelulares: citoplasma, membrana y periplasma generadas por ultracentrifugación. Se diseñó un análisis de LFQ para cada tipo de fracción. Los resultados obtenidos de este análisis a la vez de dar información sobre la expresión diferencial de proteínas entre las tres cepas bacterianas, se utilizó para comprobar la eficiencia en la generación y purificación de las fracciones subcelulares.