Identificación de genes codificantes de antígenos flagelares de Escherichia coli a través de PCR y secuenciación

ARIEL ROGE; ANA CELI; CLAUDIA VAN DER PLOEG; VALERIA PADIN

Congreso; ALAM-CAM 2016; 2016

Escherichia coli es un miembro predominante de la flora intestinal normal humana y animal. A pesar de la simbiosis entre la bacteria y el huésped, algunos serotipos se han convertido en patógenas debido a la adquisición de factores de virulencia. Los diferentes patotipos se encuentran asociados a ciertos serotipos y la caracterización de los antígenos O (somático) y H (flagelar) resultan una importante herramienta en el diagnóstico. Sin embargo, algunos antígenos H no pueden ser determinados fácilmente por aglutinación debido a la existencia de aislamientos poco móviles y reacciones cruzadas entre antígenos H que comparten epítopes comunes. La variabilidad del antígeno H está asociada con la secuencia de aminoácidos de la unidad estructural del filamento flagelar; codificada por el gen fliC. La técnica de PCR-RFLP puede ser usada para la identificación de estos antígenos sustituyendo a la serología como técnica tradicional. Las regiones 5´ y 3´ se encuentran altamente conservadas y posibilitan una amplificación del gen por PCR utilizando un mismo par de cebadores mientras que en los distintos perfiles de restricción se evidencia el polimorfismo de la región central. Sin embargo, algunos antígenos H no pueden ser caracterizados por RFLP-PCR para fliC y por esta razón se utilizan métodos de secuenciación para identificar flagelinas. La genotipificación basada el el gen fliC es particularmente útil para la caracterización de cultivos no móviles (NM) así como para la caracterización de aislamientos no tipables (NT). El objetivo general de este trabajo fue la detección del gen fliC de cultivos de E.coli NM y NT mediante PCR y su identificación posterior por secuenciación del producto amplificado. Utilizando las secuencias fliC de la base de datos del sitio web GenBank, fue posible obtener información para el diseño de cebadores en las regiones conservadas. Las secuencias de los productos amplificados fueron comparadas con las secuencias de los antígenos H descriptos y posteriormente confirmadas por serotipificación. Teniendo en cuenta que algunas flagelinas son codificadas por otros genes (flkA H3 y H47, flmA H54), los resultados observados en este estudio nos permitieron concluir que los métodos moleculares (PCR-secuenciación) fueron eficientes en la detección de antígeno H de cultivos de E. coli, proveyendo información sobre algunas características de estos antígenos pudiendo indicar la presencia de nuevos genes fliC. La técnica demostró ser más rápida que la serotipificación clásica siendo capaz de detectar nuevos genes de flagelina producidas por estas bacterias.