Obtención de una proteínas recombinante como posible candidato vacunal para reducir la colonización de E. coli O157:H7 en bovinos

ANA CELI; MARIANO LARZABAL; DANIEL VILTE

CABA

Jornada; IX Jornadas de Jóvenes Investigadores FVet-UBA; 2019

Universidad de Buenos Aires

Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) es un patógeno capaz de causar ColitisHemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) en humanos. Argentina es el país conmayor incidencia anual, con 12 a 15 casos por cada 100,000 niños menores de cinco años,siendo E. coli O157:H7 el serotipo prevalente. El ganado bovino es el principal reservorio deEHEC, que se caracteriza por poseer varios factores de virulencia, entre los cuales seencuentran: Las toxinas Shiga (Stx), que pueden ser de tipo 1 o 2; la isla de patogenicidadLEE (Locus of Enterocyte Effacement) que codifica para la adhesina Intimina, su receptorTir y el sistema de secreción de tipo III (SST3) compuesto por las proteínas Esp y variasproteínas que son traslocadas a las células de los mamíferos; además del plásmido O157. Laisla de patogenicidad LEE le confiere la capacidad de producir una lesión histopatológica enel epitelio intestinal conocida como attaching and effacing. Estudios realizados por nuestrogrupo de trabajo demostraron que terneros vacunados con las proteínas recombinantes EspBe Intγ280 presentaron altos títulos de IgG sérica. A su vez, se pudo observar una reducciónde la colonización de EHEC 0157:H7 por parte de los animales inmunizados. Este efectoprotector de la vacuna se observó tanto en la cantidad como en la frecuencia de excreción.Dado que los bovinos son el principal reservorio de esta bacteria, resulta evidente que lavacunación es una estrategia de intervención prefaena que limitaría la colonización yexcreción del ganado, reduciendo así la diseminación del patógeno en el ambiente y lacontaminación de agua, vegetales y otras especies animales. Para optimizar el desarrollovacunal proponemos fusionar ambos antígenos. Por ello el objetivo general de este trabajofue llevar a cabo el diseño de una única proteína recombinante divalente formada por losfactores de virulencia EspB e Intγ280 (codificadas por los genes espB y gen eaerespectivamente). Para la construcción de esta quimera se utilizó la técnica de Splicing byOverlap Extension. Para fusionar los dos genes con esta técnica se diseñó un oligonucleótidoforward que amplificó el extremo 5? de espB y un primer reverse para el extremo 3? deespB. Este último, además, contiene un oligonucleótido que hibrida con el extremo 5? del geneae. También se diseñaron los oligonucleótidos para el gen eae. El oligonucleótido forwardque amplificó el extremo 3? de dicho gen, y el reverse que amplificó el extremo 5? y, además,es complementario al extremo 3? de espB. Los fragmentos obtenidos fueron ligados a unvector de expresión comercial. Posteriormente se transformaron cepas E. coli BL21 y losclones positivos fueron seleccionados y secuenciados en la Unidad Genómica del CICVyAINTA. Habiendo realizado con éxito los procedimientos previos se continuará con ensayosde expresión y purificación de la proteína, con el fin de obtener a futuro un candidato vacunaldivalente para reducir la colonización de EHEC O157:H7 productora del SUH en bovinos.