Elevada frecuencia de movilización del intrón de grupo II bacteriano S.ma.I2 de Serratia marcescens

MARÍA PAULA QUIROGA; MAXIMILIANO NARDELLI; CECILIA QUIROGA; DANIELA CENTRÓN

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

El intrón bacteriano S.ma.I2 es un elemento móvil que pertenece a la clase C-attC del grupo II de intrones. Este intrón fue descripto en el aislamiento clínico de Serratia marcescens SCH909, inserto en el sitio 1L del attC de un cassette de resistencia a antibióticos dentro de la región variable de un integrón de clase 1. Estudios previos realizados en nuestro laboratorio demostraron que S.ma.I2 es capaz de invadir diferentes attCs por recombinación sitio específica. Los estudios de funcionalidad del intrón S.ma.I2 demostraron que este es capaz de realizar auto-splicing en ausencia de su proteína. Ensayos in vivo demostraron que es un proceso RecA independiente y que sus requerimientos para el reconocimiento de un nuevo sitio blanco son: los sitios de unión EBS e IBS y la estructura secundaria provista por el attC. El análisis de las regiones exónicas de los varios intrones de la clase C mostró la particularidad de estar insertados downstream de terminadores transcripcionales. Esto concuerda con el estudio de las estructuras secundarias de los attCs en donde se demostró para el intrón S.ma.I2 necesita la presencia de la misma para una correcta invasión del intrón al nuevo ADN. Varios intrones del GII han sido encontrados asociados a elementos móviles como plásmidos conjugativos, transposones, secuencias de inserción y cassettes. El objetivo de este trabajo es evaluar la capacidad del intrón S.ma.I2 de invadir diferentes sitios blanco mediante ensayos de movilidad realizados in vivo. Se seleccionaron como sitio blanco a diferentes attC y secuencias correspondientes a la unión de los exones de sitios en los que se habían encontrado insertos otros intrones del GII de clase C-attC, que poseían diferencias estructurales con el sitio en el que encontró originalmente al S.maI2. Se clonaron los sitios blanco seleccionadas para los ensayos de recombinación. Los ensayos in vivo de movilidad del intrón se realizaron como fue descripto previamente por Quiroga C. 2.008 y la frecuencia de invasión del intrón se determinó por PCR utilizando primers específicos. Los productos obtenidos fueron secuenciados. Se observó que el intrón S.ma.I2 invadió diferentes sitios blanco propuestos. Para el caso del attCsat2 se obtuvo una frecuencia de invasión del 1% y para el caso del sitio shSAR-1, encontrado en el genoma Shewanella spp., se alcanzó una frecuencia del 15%. A partir de ensayos in vivo de movilidad del intrón realizados en este trabajo, se puso en evidencia que el intrón S.ma.I2 es capaz de reconocer sitios alternativos al que fue encontrado originalmente y que no sólo reconoce diferentes sitios attC sino que también es capaz de invadir sitios en los que en los que se habían encontrado insertos otros intrones del GII de clase C-attC y los reconoce con frecuencias muy dispares. El hecho de que el S.ma.I2 reconozca con mayor frecuencia a estos sitios que a los attCs, aporta nuevas evidencias a favor de que el S.ma.I2 tiene un origen ancestral en el genoma bacteriano y que reconoce sitios alternativos asociados a la transferencia horizontal que le permiten diseminarse y persistir en los genomas bacterianos.