Mecanismos implicados en la formación de exosomas en Giardia lamblia

MOYANO, SOFÍA; MUSSO, JULIANA; LANFREDI-RANGEL, ADRIANA; TOUZ, MARÍA CAROLINA

Congreso; XXII Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Los exosomas son una forma de vesícula extracelulares (VEs) y representan un importante modo de comunicación intercelular, permitiendo la transferencia de proteínas, lípidos, ARNm y microARN de una célula a otra. Son una población de origen endosomal homogénea que se almacenan dentro de los cuerpos multivesiculares (Multivesicular Bodies o MVBs) y se liberan cuando éstos se fusionan a la membrana plasmática. La formación de los MVBs es impulsada por la maquinaria ESCRT (Endosomal Sorting Complex Required for Transport) formada por cinco complejos (0, I, II, III y Vps4) que son reclutados secuencialmente desde el citoplasma a la superficie de la membrana endosomal, mientras que la liberación está mediada por pequeñas GTPasas denominadas proteínas Rabs. Giardia lamblia carece de MVBs, de un complejo ESCRT completo y de la totalidad de proteínas Rabs presentes en mamíferos; sin embargo, se ha reportado que es capaz de producir VEs. En este trabajo, se aislaron vesículas del parasito G. lamblia incubando los trofozoítos en medio libre de suero, seguido por una centrifugación a baja velocidad, filtración y ultracentrifugación. Las vesículas obtenidas se evaluaron mediante microscopia electrónica, Dinamic Light Scatter (DLS), ensayos de Western blot y espectrometría de masa. Por otro lado, con el objetivo de evaluar si la proteína asociada a ESCRT Vps4a y Rab11 se encuentran implicadas en la formación de estas vesículas en G. lamblia se utilizaron trofozoítos transgénicos glvps4a-ha (sobreexpresa GlVps4a-HA), glvps4a-as (knock-down para GlVps4a), glrab11-ha (sobreexpresa GlRab11-HA) y glrab11-as (knock-down para GlRab11) y se evaluó la producción de exosomas en cada una de las cepas mediante DLS. Además, analizamos si se producían cambios morfológicos en las células transgénicas. Se realizó microscopia electrónica de transmisión y se pudo observar la presencia de ?vesículas? dentro de las vacuolas periféricas (PVs) en los trofozoítos que sobreexpresan tanto Vps4a como Rab11, mientras que en las cepas silenciadas no observamos vesícula intraluminares, apoyando los resultados que indicaban una ausencia en la producción de exosomas en trofozoítos transgénicos silenciados. Los resultados obtenidos sugieren que G. lamblia es capaz de producir y secretar vesículas con características de exosomas, que Vps4a y Rab11 podrían estar implicadas en la formación de estas vesículas y, además, que las vacuolas periféricas podrían estar actuando como cuerpos multivesiculares en este parásito.