Alternativas para la separación de carbamazepina de su metabolito principal en suero humano mediante electroforesis capilar aistida por distintos surfactantes

VERA CANDIOTI L, GOICOECHEA H Y OLIVIERI A.

Merlo, San Luis

Congreso; III Congreso Argentino de Química Analítica; 2005

AAQA

La carbamazepina (CBZ) es una droga utilizada en el tratamiento de muchas formas de epilepsia y la esquizofrenia. Los metabolitos principales son la epoxi-carbamazepina (CBZ-EP), que posee actividad anticonvulsiva y la dihidroxi-carbamazepina, sin propiedades farmacológicas. El análisis de rutina utiliza métodos inmunológicos, que tienen la desventaja de presentar reactividad cruzada. También se han propuesto métodos basados en técnicas separativas: cromatografía gaseosa (CG), cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) y electroforesis capilar (EC), en su modalidad asistida por el uso de dodecil sulfato de sodio (SDS) como surfactante. En la separación de enantiómeros por EC, frecuentemente se usan ciclodextrinas (CD) como diferenciadores. Los analitos de interés (CBZ y CBZ-EP) no son isómeros entre sí, pero su estructura difiere en un átomo de oxígeno, lo que justifica la utilización de las CD. Estos selectores quirales tienen un elevado costo y existe una gran variedad de formas (sustituidas y no sustituidas), por lo que es difícil predecir cuál de ellas funcionará en un sistema en particular. La carga neutra y similares propiedades fisicoquímicas de los analitos imposibilitan su separación mediante electroforesis capilar zonal (ECZ) y obliga a encontrar una sustancia que interaccione de manera diferencial con ambas especies, para proporcionar una movilidad electroforética diferente que favorezca la separación. En este trabajo se propone el uso de surfactantes de uso habitual, de fácil acceso y más económicos, como lo son el tritón X-100 y el tween 80 para lograr este propósito. Las condiciones de ECZ para determinar ambos picos por separado fueron: 20 mM de una solución reguladora de fosfato de sodio pH 8.00, detección a 214 nm y un voltaje de 20 kV. Bajo estas condiciones, los picos de ambas especies se superponen, ya que poseen el mismo tiempo de migración de 5.4 min. Luego de verificar la separación de ambas especies con elevadas concentraciones de surfactantes, se determinó la concentración a la cual se comenzaba a observar la resolución de ambas especies (se eligió tritón X-100 por ser el que proporcionaba mejor forma de pico). Se realizaron corridas electroforéticas de una muestra que contenía 5 ppm de cada especie bajo las condiciones de ECZ donde los picos de ambos analitos se superponían, con diferentes concentraciones de tritón X-100, comenzando con la concentración micelar crítica (CMC). Los electroferogramas mostraron que a partir de 6 mM de surfactante comienza a observarse la separación de picos. Dicha concentración corresponde a una solubilización de las especies dada por una interacción de una micela de tritón X-100 con una molécula de analito. Finalmente, se realizó la separación en muestras de suero humano conteniendo ambos analitos, procediéndose a su cuantificación, previa construcción de curvas de calibrado. Se puede concluir que el uso de surfactantes distintos del SDS permite el desarrollo de métodos separativos simples, de bajo costo y accesibles a los laboratorios de monitoreo de fármacos.