Diseño de nanopartículas inmunogénicas constituidas por epitopes de toxinas de arácnidos para la producción de antivenenos

J. A. RODRIGUEZ; L.C. IGLESIAS GARCÍA; G. R. BARREDO VACCHELLI; A. M. BIROCCO; A. BLACHMAN; G. C. CALABRESE; S. A. CAMPERI

Workshop; Fronteras en nanobiotecnología III; 2022

Existen en Argentina especies de arácnidos de importancia médica capaces de provocar envenenamiento en humanos, afectando principalmente el sistema cardiovascular y pulmonar. Para su tratamiento, se administran antivenenos cuya producción requiere la captura de los arácnidos y la extracción de sus venenos por electroestimulación, un método engorroso, peligroso y de bajo rendimiento. Dichos venenos son luego inyectados en caballos para la producción de sueros antivenenos. Gran parte de los compuestos responsables de los síntomas de envenenamiento por arácnidos son péptidos con gran cantidad de puentes disulfuro altamente estables y difíciles de degradar por las células presentadoras de antígenos (péptidos con nudos de Cys) por lo que son poco inmunogénicos.En el presente trabajo, utilizando la herramienta “MHC-II Binding Predictions” del “Immune Epitope Database Analysis Resource”, se identificaron los epitopes de las principales toxinas responsables del envenenamiento causado por Phoneutria nigriventer y Tityus trivittatus. Los epitopes identificados se sintetizaron en fase sólida usando química Fmoc/tBu. Para aumentar la inmunogenicidad de los pequeños péptidos, se desarrollan nanopartículas de manera de aumentar su tamaño utilizando estrategias alternativas: a) péptidos ramificados (dendrímeros) y b) péptidos lineales y ramificados unidos a ácidos grasos.Se estudió la pureza, identidad y citotoxicidad de los péptidos sintetizados. Su pureza y correcta síntesis fue verificada por RP HPLC y ESI MS, donde las m/z de los picos obtenidos correspondieron a los péptidos sintetizados. La citotoxicidad de los péptidos fue estudiada sobre la línea de monocitos de ratón (Raw 264.7) evaluando la actividad de la 4-succinato dehidrogenasa (ensayo de MTT), demostrándose su falta de toxicidad.Sobre la base de los resultados obtenidos se realizarán los estudios de activación de monocitos para evaluar su inmunogenicidad relativa con el objetivo de desarrollar inmunógenos adecuados para la producción de antivenenos a gran escala y así satisfacer las demandas a nivel nacional y regional.