Fotoinactivación de cultivos planctónicos y biopelículas bacterianas empleando acido 5-aminolevulínico

JEREZ PELLEGRINO, T; CERVINI BOHM, G; DI VENOSA, G; SAENZ, D; CALVO, G; CÉSPEDES, M; BUZZOLA, FR; CASAS, A

Congreso; 17 Congreso Internacional de Medicina Interna del Hopiatl de Clínicas José de San Martín de la UBA; 2018

Objetivos: La fotoinactivación bacteriana es un tratamiento que hace uso de una molécula fotosensibilizante (FS) que al ser irradiada con una longitud de onda específica genera especies reactivas de oxígeno con la consecuente muerte del microorganismo. Por otro lado, las infecciones resistentes a los antibióticos representan un importante problema clínico, el cual se debe en su mayoría a la formación de biopelículas. En consecuencia, nos encontramos con una necesidad creciente de nuevas terapias alternativas al empleo de antibióticos. En este trabajo se evalúa la acción del ácido 5-aminolevulínico (ALA) como precursor de porfirinas fotosensibilizantes, en cultivos planctónicos y en biopelículas de Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.Materiales y métodos: Se trabajó con biopelículas de 24 hs de crecimiento sobre placas de poliestireno y cultivos planctónicos de una DO600 0,7. Luego de la incubación en oscuridad con diferentes concentraciones de ALA se irradiaron las bacterias con una luz blanca no coherente. La determinación de la eficiencia del tratamiento se realizó por el recuento de UFC/ml. Conjuntamente, se cuantificó y se determinó el tipo de porfirina sintetizado por fluorometría y HPLC.Resultados: La Fotoinactivación bacteriana con concentraciones de ALA entre 1 y 2 mM redujo al menos 6 logs la viabilidad tanto del cultivo planctónico como de las biopelículas de ambas cepas de bacterias Gram positivas analizadas. En el caso de las Gram negativas, sólo P. aeruginosa mostró una sensibilidad de 4 logs al tratamiento en cultivos planctónicos.Las porfirinas sintetizadas por las bacterias Gram positivas alcanzaron un máximo a concentraciones de 1 y 2 mM para cultivos planctónicos y biopelículas respectivamente, concentraciones a las cuales se observa la mayor respuesta a la terapia. Además, también se observó un cambio en el perfil de las porfirinas sintetizadas a mayores concentraciones de ALA, coincidente con una disminución en la respuesta a la Terapia.Concusiones: En conclusión, los resultados obtenidos indican que la Fotoinactivación empleando ALA es una herramienta alternativa a los antibióticos en el control del crecimeinto de bacterias Gram positivas y algunas Gram negativas en cultivos planctónicos y en biopelículas. Al mismo tiempo, la sensibilidad de este tratamiento estaría directamente relacionada con el perfil y cantidad de porfirinas sintetizadas. Sin embargo, es necesaria la optimización de este tratamiento para bacterias Gram negativas.