Importancia del polisacárido capsular (PC) y de la proteína de adhesión extracelular (Eap) en la internalización de Staphylococcus aureus

ALVAREZ, LP; GORDIOLA M; BARBAGELATA MS; SORDELLI, DO; BUZZOLA FR

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

La patogénesis de S. aureus es un proceso complejo que involucra diferentes factores de virulencia, los cuales son expresados coordinadamente durante la infección. Se sabe que la pérdida de PC facilita la internalización en células endoteliales. Se demostró que Eap es importante en la adherencia de S. aureus a células eucariotas. El sistema regulatorio Sae regula positivamente a Eap. El factor de transcripción MgrA regula positivamente la expresión de PC. El objetivo de este trabajo fue estudiar la importancia del PC y Eap y de sus principales reguladores Sae y MgrA en la invasión de S. aureus en células eucariotas. Para ello se infectaron células epiteliales MAC-T con suspensiones de las cepas Newman (PC+), RN6390 (PC-), Reynolds PC+ y su isogénica PC-, AH12 (Newmaneap-), Newmansae-, RN6390sae- y NewmanmgrA-. Luego de 1 h de incubación a 37ºC, las monocapas se lavaron con PBS y se incubaron con lisostafin. A las 2 h postinfección, se sembraron los lisados celulares y se contaron las UFC/ml. Resultados: Internalización en células MAC-T: Newman: 8.5x104 vs RN6390: 5x105 UFC/ml, *p<0.01. Cepas Reynolds, PC5+: 16.3% vs PC5-: 100%, *p<0.01. Newman: 2x105 vs AH12: 4x104 UFC/ml, *p=0,001. Newman: 8.5x104 vs Newmansae: 1.5x104, *p<0.01. RN6390: 5x105 vs RN6390sae: 4,7x104, *p<0.01. Newman: 5.4x104 vs Newmanmgr: 1.4x105 *p<0.01, Mann-Whitney test. Además, se observó mediante SDS-PAGE que la mutante Newmansae no expresó Eap y mediante ouchterlony se comprobó que la mutante NewmanmgrA no expresó PC. Los resultados demuestran que la presencia de cápsula disminuye la capacidad de internalización de S. aureus, mientras que Eap favorece la internalización de la cepa Newman en células epiteliales y endoteliales. Además, las mutantes sae no expresan Eap, por lo que poseen una capacidad diminuida para invadir células epiteliales, mientras que la mutante mgrA al no expresar PC presenta un aumento en su internalización con respecto a la cepa salvaje. Los resultados permiten concluir que los factores de virulencia PC y Eap, así como también sus principales reguladores sae y mgrA juegan un rol importante en la internalización celular de S. aureus.