ESTUDIO DE PRECIPITACION REVERSIBLE DE POLIETILENIMINA COMO ESTRATEGIA APLICADA A LA BIOSEPARACION DE PROTEINAS

ALEJANDRA MANZUR, DIANA ROMANINI .; GUILLERMO PICÓ

Rosario

Congreso; Sociedad de Biología de Rosario; 2006

La precipitación de proteínas empleando polielectrolitos sintéticos o naturales ha emergido como una nueva técnica de bioseparación. Esta consiste en agregar un polielectrolito soluble a un extracto crudo conteniendo la proteína a purificar y lograr las condiciones del medio más adecuadas para lograr que en el precipitado esté presente mayoritariamente la proteína de interés (mediante cambios de pH, temperatura, agregado de sales, fuerza iónica, ect.). El objetivo de este trabajo fue estudiar las condiciones experimentales bajo las cuales el polímero sintético polietilenimina (PEI), se vuelve insoluble y analizar su capacidad de precipitar proteínas. Dicho polímero se caracteriza por poseer grupos cargados positivamente en un amplio rango de pH.  La técnica empleada para analizar el efecto de la concentración del polímero, fosfato, cloruro de sodio, temperatura y pH, sobre la precipitación del polímero, fue la medición de absorbancia del medio a 420 nm (turbidez). La determinación de la concentración de proteína previa y posterior a la precipitación se midió espectrofotométricamente a 280nm. Se realizaron gráficos de turbidez vs. pH para distintas concentraciones (%p/p) de PEI, de los cuales se obtuvieron los correspondientes diagramas de fase. Se estudió también el efecto de distintas sales de sodio (NaCl, NaBr, Na2SO4, NaF ), el efecto de la concentración de NaCl (fuerza iónica) y el de la concentración de fosfato sobre la turbidez del sistema. Una vez ajustadas las mejores condiciones experimentales se procedió a la precipitación de diferentes proteínas modelo (Albúmina sérica bovina, Lisozima y Pepsina), que al pH de trabajo (5,5), poseen diferente carga eléctrica neta. El porcentaje no precipitado de cada una de ellas fue: 100; 90,9 y 55,4 % respectivamente. Cabe destacar que el método propuesto se mostró potencialmente aplicable para precipitar proteínas con carga eléctrica neta negativa.