Estandarización de técnicas moleculares para Trialeurodes vaporariorum presente en cultivos frutihortícolas de Misiones

UBIETA, C.; FONSECA, M.I.; BELTRAMINO, A.A.; STOLAR, E.C.

Posadas

Jornada; IX Jornadas Científico Tecnológicas de la Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales de la Universidad Nacional de Misiones; 2015

Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales de la Universidad Nacional de Misiones

Trialeurodes vaporariorum (Westwood, 1856) (Hemiptera: Aleyrodidae) conocida como la mosca blanca de invernadero, es una especie plaga de cultivos ornamentales y frutihortícolas de gran importancia económica, cosmopolita y polífaga. La identificación morfológica de géneros y especies de aleyrodidos se basa principalmente en el pupario, que no solo es difícil de manipular, sino que además, su apariencia morfológica se ve afectada por su especie hospedadora, dificultando aún más la identificación. Esta tarea se ha optimizado mediante el uso de marcadores moleculares específicos ubicados en el gen Citocromo Oxidasa subunidad I (COI), pudiendo llevarse a cabo en cualquier estadio del desarrollo, delimitando correctamente la especie y reforzando la identificación morfológica convencional. En la actualidad, los loci microsatélites, debido a que están extensamente distribuidos en el genoma, tienen herencia codominante, exhiben abundante variación, y dan resultados reproducibles, son utilizados para estudiar la genética de poblaciones en insectos; sin embargo, la información existente para la especie en esta área es mundialmente escasa. El objetivo del presente trabajo fue estandarizar técnicas moleculares, i.e. extracción de ADN genómico, amplificación por Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) del fragmento del gen COI y de siete pares de marcadores microsatélites en Trialeurodes vaporariorum de la provincia de Misiones. La extracción de ADN genómico total se realizó a partir de hembras de Trialeurodes vaporariorum (colectadas en L.N. Além, provincia de Misiones) mediante el protocolo CTAB según Navajas et al. (1998) con modificaciones. Las extracciones se utilizaron para llevar a cabo las amplificaciones del marcador mitocondrial COI con cebadores especie específicos y las amplificaciones de los siete pares de marcadores microsatélites. Las amplificaciones se efectuaron empleando técnicas de PCR según Gao, et al. (2014) con ajustes en las proporciones de reactivos utilizados en las PCR y en los ciclados. Se obtuvieron extracciones de ADN genómico total a partir de 32 hembras de Trialeurodes vaporariorum. Se amplificó el marcador COI (752 pb) para las 32 hembras. Por último, se amplificaron siete pares de marcadores microsatélites para un solo individuo obteniéndose bandas del tamaño esperado (147-268 pb). En conclusión, se estandarizaron las técnicas moleculares aplicando las modificaciones y ajustes anteriormente mencionados. A través de la estandarización de las técnicas, se espera obtener la materia prima para aplicar en otras técnicas moleculares, reducir los costos frente al uso de kits de extracción, establecer una metodología para optimizar la identificación taxonómica de la especie y realizar estudios genéticos poblacionales, arrojando luz sobre cuestiones como rutas de entrada, flujo génico, dispersión de las poblaciones de T. vaporariorum en la provincia de Misiones y a través de ellas desarrollar estrategias de control eficaces.