Interacción del péptido cíclico microcina J25 y un análogo lineal con micelas mixtas de fosfatidilcolina y detergente

BELLOMIO, AUGUSTO; ARCURI, BEATRIZ FERNANDEZ DE; DELFINO, JOSÉ M.; MORERO, ROBERTO D.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Buenos Aires. Argentina

Congreso; XXXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2002

Sociedad Argentina de Biofísica

MccJ25 es un péptido antimicrobiano de estructura cíclica aislado en nuestro laboratorio. Tiene actividad bacteriostática sobre varias cepas de Escherichia coli. Actúa inhibiendo la síntesis de RNA debido a que su blanco de acción es la subunidad beta´ de la RNA polimerasa. Por otra parte presenta actividad bactericida sobre una cepa patógena de Salmonella newport a la cual le produce alteraciones en la permeabilidad de la membrana citoplasmática que llevan a la disipación del potencial. También interacciona con liposomas artificiales de fosfatidilcolina, produciendo alteraciones en su microviscosidad. MccJ25L-2 es un análogo lineal obtenido por proteólisis del peptido cíclico con termolisina. Tiene dos aminoácidos menos que el péptido nativo y presenta actividad antimicrobiana sólo sobre Salmonella newport. Experimentos de transcripción “in vitro” revelaron que inhibe la RNA polimerasa de E. coli de un modo similar a la MccJ25 nativa. Los cambios en la conformación y en el entorno de las tirosinas de MccJ25 y MccJ25L-2 en solución acuosa y luego de la interacción con micelas mixtas de PC y detergente no iónico (C12E10) se estudiaron por dicroismo circular y por fluorescencia intrínseca, respectivamente. Los resultados obtenidos indican que los espectros de CD en el UV lejano no son asignables a ninguna estructura secundaria. No obstante podemos destacar que presentan una banda positiva característica a 223 nm y son negativos por debajo de 210 nm. Ambos péptidos se encuentran formando agregados o multímeros en solución acuosa. Los dos péptidos probados sufren cambios conformacionales cuando interaccionan con las micelas mixtas y el máximo cambio observado en los espectros de CD se obtiene cuando la relación péptido/PC es aproximadamente 35. La fluorescencia intrínseca de tirosina de los péptidos disminuye en presencia de concentraciones crecientes de micelas mixtas. El mínimo de fluorescencia se alcanzó a la misma relación péptido/PC que se obtuvo para lograr el máximo cambio en los espectros de CD. Los controles usando micelas puras de C12E10 solo produjeron un cambio conformacional en MccJ25L-2 y la emisión de fluorescencia de Tyr en este caso aumentó. Para MccJ25 no se observaron cambios en CD ni fluorescencia. Estos resultados indicarían que la presencia de PC en las vesículas es importante para que se produzca un cambio conformacional del péptido cíclico y que la interacción del péptido lineal con micelas puras es distinta a la que se da con micelas mixtas e induce también un cambio conformacional. Los residuos aromáticos de MccJ25, en particular Tyr estarían involucrados en gran medida en la interacción con las micelas.