Empleo de un sistema de inyección secuencial para la preparación de una membrana mimética y la evaluación de los efectos membranotrópicos de un contaminante emergente

FLORENCIA SAN ROMÁN NÁPOLI; MARIA BELEN SIERRA ; CAROLINA ACEBAL

San Juan

Congreso; XII Congreso Argentino de Química Analítica (XII CAQA 2023); 2023

Universidad Nacional de San Juan

Los contaminantes emergentes (CECs) son compuestos de preocupación ambiental debido a quesu presencia en el ambiente tiene potencial impacto en la salud humana y en los ecosistemas. Estoscompuestos incluyen una variedad de sustancias, como productos farmacéuticos, productos dehigiene personal, productos químicos industriales, entre otros. La utilización de liposomas comomodelos de membranas permite anticipar el impacto de estas sustancias en términos de toxicidaden organismos, sin recurrir al uso de membranas biológicas ni a la experimentación con seres vivos1.En este trabajo, se llevó a cabo la preparación, de forma automática, de una membrana modelocompuesta por Dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) y se evaluó el efecto de un fármaco de uso masivo,losartan (LOS), sobre la permeabilidad de la misma realizando ensayos de liberación de la sondafluorescente calceína. Para llevar a cabo la automatización, se diseñó un sistema de análisis deinyección secuencial (SIA) con la incorporación en línea de una cámara de mezclado para lapreparación de la membrana. El sistema SIA consta de una bomba pistón, conectada a una válvulade multiposición (VMP) mediante un reactor de retención (“holding coil”). A su vez, la celda depreparación, termostatizada a 60°C, se acopló al sistema mediante los puertos de la VMP. Elmétodo de preparación se basó en la rápida inyección de una solución etanólica de DPPC (60 µL,150 µL s-1) en agua ultrapura (1940 µL). Para el ensayo de liberación, se reemplazó el agua por unasolución de calceína de 62,8 mg L-1, para encapsular la sonda dentro del liposoma. La agitación dela disolución fue asistida por aire (1100 µL), que se introdujo en el sistema como cualquier otroreactivo, y se envió a la celda (150 µL s-1).Se comprobó la formación del liposoma en agua utilizando las técnicas de potencial Zeta, tamaño,densidad y velocidad del sonido. Por otro lado, para remover la calceína extra-liposomal, lasuspensión compuesta por el liposoma y calceína se centrifugó a 4000 rpm durante 10 min, seseparó el sobrenadante y se re-suspendió en agua ultrapura. Se midió la intensidad de fluorescenciade la suspensión liposomal que contiene la calceína atrapada a 25 °C (λex= 452 nm y λem= 513 nm).Luego, se agregó al liposoma 50 µL de una solución de LOS de 400 mg L-1 y se midió el cambio enla intensidad de la señal fluorescente cada 5 min durante 30 min. El experimento finalizó con elagregado de 10 µL de Tritón X-100 al 3%. La fracción de calceína liberada se calculó según Seiichiet al2.Como conclusión, se logró preparar de forma automática una membrana modelo de DPPC,comparable con la membrana preparada de forma manual. Por otro lado, se observó una liberaciónconstante de la calceína, lo que se puede atribuir a la perturbación de la superficie de la membranapor la presencia del contaminante.