Análisis filogenético de genes putativos de Fosfolipasas A de Leishmania spp. como posible marcador molecular

LOPEZ, SEBASTIAN ANDRES; GIMÉNEZ, GUADALUPE; MARCO, DIEGO; RUYBAL, PAULA; BELAUNZARÁN, MARIA LAURA; LAUTHIER, JUAN JOSE

Buenos Aires

Simposio; XXI Simposio Internacional Mundo Sano; 2023

Fundacion Mundo Sano

Introducción: Las Leishmaniasis son parasitosis causadas por diversas especies del género Leishmania y que junto con los mecanismos inmunes del hospedero resultan en un amplio espectro de manifestaciones clínicas, histopatológicas e inmunopatológicas. En Argentina coexisten L. (Viannia) braziliensis, L. (Leishmania) amazonensis y L. (Viannia) guyanensis, especies responsables de Leishmaniasis tegumentaria y en el caso de L. (Leishmania) infantum causante de Leishmaniasis visceral. Las Fosfolipasas A1 (PLA1) son enzimas que hidrolizan fosfolípidos en la posición sn-1 y si bien se han detectado PLA1 en muchos organismos, sólo un número limitado de secuencias nucleotídicas están disponibles para su comparación y clasificación. En relación a tripanosomátidos, varios genomas han sido completamente secuenciados pero son pocas las secuencias de PLA1 identificadas: Trypanosoma brucei, T. cruzi y L. braziliensis (GenBank ACCN: AJ716154.1, JN975637, KJ957826). En el presente trabajo amplificamos, secuenciamos y analizamos por herramientas bioinformáticas los genes putativos de PLA1 de Leishmania spp. a partir del gen de la PLA1 de L. braziliensis (LbPLA1), previamente identificado y caracterizado mediante clonado y expresión por nuestro grupo (Bott y col. 2020). Métodos: Se amplificaron por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) los genes putativos de las PLA1 de L. amazonensis (LaPLA1), L. infantum (LiPLA1) y LbPLA1 a partir de ADN de promastigotes de cultivo axénico de dichas especies y de ADN de aislados de muestras clínicas. Los productos amplificados se separaron por electroforesis en geles de agarosa 2% y se secuenciaron por el método de Sanger (Macrogen Inc., Corea). Se generaron las secuencias nucleotídicas consenso para cada especie, utilizando el software STADEN Package y posteriormente se alinearon, curaron y se hizo el análisis filogenético mediante MEGA 7. Se construyeron árboles filogéneticos para el gen de la PLA1 a partir de las secuencias disponibles en las bases de datos (NCBI ó TriTrypDB) y las propias por el método de Neighborhood Joining (NJ) concatenado utilizando MLSTest. Resultados: El análisis bioinformático de todas las secuencias nucleotídicas permitió diferenciar los subgéneros L. Viannia y L. Leishmania, los distintos complejos de especie L.(L).donovani y L.(L).mexicana y las distintas especies dentro de cada complejo, respetando la taxonomía del género.En el caso de L.infantum, dentro del complejo L.(L).donovani, se obtuvo un agrupamiento con alto valor de soporte de rama que incluyó todos los aislados clínicos analizados para esta especie confirmados por HSP70, mientras que para L.braziliensis, dentro del subgénero Viannia, se obtuvo un resultado similar con todos los aislados clínicos estudiados.Conclusiones: PLA1 es un nuevo marcador molecular en la diferenciación de Leishmania spp. Su aporte junto a otros marcadores moleculares de referencia como HSP70 merece ser estudiado en profundidad.