Síntesis y caracterización de un conjugado fluorescente de LPS.

DIEGO PALLAROLA; FERNANDO BATTAGLINI

Tandil, Pcia. Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Fisiquímica y Química Inorgánica; 2007

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

Las endotoxinas, también llamadas lipopolisacáridos (LPS), son constituyentes de la membrana externa de las Bacterias Gram-negativas. Ellas son responsables de generar fiebre, y un cuadro clínico denominado shock séptico cuando ingresan al torrente sanguíneo. El shock séptico es causa de unas 200.000 muertes al año en EE.UU. y se caracteriza por la disfunción progresiva de los órganos principales. La molécula de lipopolisacárido puede dividirse en tres partes: una porción lipídica no polar, llamada lípido A, una porción central constituida por un oligosacárido, denominado core, y un heteropolisacárido que representa la superficie antigénica de la bacteria, llamado o-antígeno. Por su estructura, el estudio de la acción de LPS sobre sistemas biológicos es solo posible a través de su conjugación con fluoróforos u otros marcadores. Por otra parte, dada su tendencia a formar agregados su derivatización con técnicas comúnmente utilizadas en azúcares rinde pobres resultados y pérdida de su actividad endotóxica. En este trabajo, se presenta la conjugación de LPS proveniente de Salmonella minnesotaSalmonella minnesota activando los grupos –OH presentes en la molécula con CNBr, reactivo utilizado comúnmente en fase heterogénea para derivatizar polisacárdios. Con esta metodología se logra una alta derivatización de la molécula, 6 sondas fluorescentes por una molécula de LPS, rendimiento muy superior al presentado comúnmente en la bibliografía, ya que por lo general la estructura polisacárida se trata con periodato para generar grupos carbonilo y posterior modificación. El conjugado conserva una importante actividad endotoxica, con lo cual puede utilizarse a bajas concentraciones. Su interacción con una molécula utilizada comúnmente para su reconocimiento, polimixina B, permite estimar la posición en que las sondas fueron unidas a la molécula de LPS.