INVESTIGADORES
ARAMENDIA Pedro Francisco
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la dinámica de asociación de proteínas por técnicas de microscopía de fluorescencia de alta resolución
Autor/es:
MIGUEL ANGEL MORALES VÁZQUEZ; LUCAS TEDESCO; EDUARDO ARZT; PEDRO F. ARAMENDÍA
Lugar:
Carlos Paz
Reunión:
Congreso; XX Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2017
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica
Resumen:
p { margin-bottom: 0.25cm; direction: ltr; line-height: 120%; text-align: left; }p.western { font-size: 12pt; }p.cjk { font-size: 12pt; }p.ctl { font-size: 12pt; }a:link { color: rgb(0, 0, 255); }MotivaciónElestudio de la asociación molecular de proteínas, con marcaciónespecífica de cada una, por microscopia STORM de resoluciónespacial nanométrica[1],con seguimiento de su evolución temporal.Este proyecto se inscribe en una colaboración con el IBioBA-MPSPpara estudiar el efecto de RSUMEen la desregulación de la proteína pVHLque conduce a la tumorogénesis.ResultadosLatécnica STORM, de súper resolución, requiere que los fluorórforosutilizados puedan encenderse y apagarse (blinking). Los primerosensayos desde el punto de vista fotofísico se orientaron a detectarel blinking de los fluoróforos con que marcaremos las proteínas.(Figura 1). Estas se expresaron con las marcas SNAP y CLIP (ParaSNAP, se utilizó el plásmido control: pSNAPf-Cox8Aypara CLIP: elplásmido control: pCLIPf-H2B),en los que se usaron tres rodaminas modificadas con una funcionalidadque permite unirlas covalentemente a ellas, para luego insertarlas alíneas celulares para realizar el control positivo (Cos7y CHO-K1).(La Figura 2 muestra la estructura general de los colorantes).Concretamente se usaron 505-Start, TMR y SiR-647 con máximos deemisión a 532, 580 y 661 nm, respectivamente (Figura 3). En unmicroscopio de campo amplio se obtuvieron las secuencias de imágenesen células del tipo Cos7,marcando la proteína SNAPf-Cox8A(parael caso de SNAP)y en la histona, H2B,para el caso de CLIP) conlos tres fluoróforos. Para cada uno de ellos, se analizó ladistribución de tiempos de encendido, de la intensidad por cuadro ydel número total de fotones emitido en cada evento de encendido También pudimos realizar reconstrucción de imágenes por STORM.    ConclusionesLostres colorantes propuestos mostraron propiedades adecuadas para seraplicables en técnicas de súper resolución basadas en propiedadesde moléculas únicas. El siguiente paso será dilucidar el mecanismode asociación molecular utilizando dichos colorantes.ReferenciasJones,S. A.; Shim, S-H.; He, J. y Zhuang, X.; Naturemethods;2011;8(6); pp. 499
rds']