IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS DE POZOS DE PETRÓLEO

RICARDO W. MASUELLI; CARLOS F. MARFIL; PAULA CORNEJO; ROCÍO TORRES

2002-05-01

2002-12-20

Biológica

Rec.Nat.No Renov.-Petroleo crudo y gas natu

1.      Identificación de bacterias sulfato reductoras (SRB) y bacterias denitrificantes (DNB) en dos pozos, uno del Yacimiento Chihuido y otro del Yacimiento Lomita. 2.      Identificación del espectro general de bacterias en muestras provenientes dos pozos, uno del Yacimiento Chihuido y otro del Yacimiento Lomita. 3.      Medición de SRB y DNB en dos estudios de perturbación por adición de nitrito a dos pozos productores, uno del Yacimiento Chihuido y otro del Yacimiento Lomita. Metodología. 1.      Toma de muestras. Referido a: colección, separación y concentración de la biomasa de bacterias estará a cargo del Laboratorio de Biotecnología Ambiental. Según el análisis de la bibliografía sería conveniente que la colección de bacterias se realice pasando unos 3,5 litros de agua por filtros 0,22 mm STERIVEX (millipore, Bedford, Mass.). 2.       Extracción de ADN. Los filtros con las bacterias se tratarán con el buffer de extracción de ADN y luego se seguirán los pasos del protocolo de extracción según Murray et al. 1998. Appl. Environ. Microbiol. 64:2585. 3.      Reacciones de Amplificación. Para la amplificación in-vitro se utilizarán los primers 27f y 1525 para amplificar eubacterias y los primers Arch21F y Arch 958r para arqueobacterias (Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics, 1991). El producto de la amplificación será una mezcla de fragmentos de ADN provenientes de distintas bacterias de la comunidad bacteriana. 4.      Clonado de los productos de amplificación. El objetivo de este paso es poder aislar los productos de amplificación para luego poder secuenciarlos. Se clonarán en plásmidos y se transformarán bacterias competentes, las bacterias que tengan los plásmidos clonados se asilarán y se harán minpreps para extraer los plásmidos. 5.      Secuenciado. Se realizará a través de un servicio de secuenciado. 6.      Análisis de las secuencias de ADN. Las secuencias se enviarán al GenBank y se analizarán con el programa BLAST de la base de datos de ribosomas.