Desmetilación del ADN por tratamiento con 5´-Azacitidina en la especie silvestre de papa Solanum commersonii

M. ROCÍO TORRES; CARLOS F. MARFIL; RICARDO W. MASUELLI; ELSA L. CAMADRO

Viña del Mar- Chile

Congreso; REDBIO 2007; 2007

Las modificaciones en los patrones de metilación del ADN pueden provocar alteraciones heredables con importantes consecuencias fenot¨ªpicas. Estos mecanismos operan a nivel de regulación génica, restringiendo o permitiendo el acceso de la maquinaria de transcripción al ADN. En la literatura se ha informado la inducción de desmetilación heredable en plantas superiores mediante tratamiento con el agente químico 5´ Azacitidina. Sobre la base de esos antecedentes, se trataron semillas botánicas pre-germinadas de S. commersonii Dun. con este agente desmetilante para obtener plantas hipometiladas que trasmitan los patrones de metilación alterados a la descendencia. Se utilizaron tres concentraciones del desmetilante (0, 10 y 50 um) y dos tiempos de exposición (3 y 6 días). A nivel morfológico se evaluaron caracteres cualitativos y cuantitativos en tres momentos después de la aplicación del tratamiento (30, 60 y 100 días). A nivel molecular se empleó la técnica de Southern Blot con la enzima HpaII, sensible a la metilación, en muestras de ADN obtenidas a los 30 y 100 días después de la aplicación del tratamiento. A los 30 y 60 días, se observaron diferencias morfológicas entre tratamientos que desaparecieron a los 100 días, por lo que no hubo diferencias entre plantas tratadas y controles. Las plantas tratadas con 50 uM durante seis días no superaron la altura de 10 cm y el segundo mes de vida. A nivel molecular, se esperaba que la enzima HpaII cortara con mayor frecuencia en los genomas desmetilados por efecto del tratamiento. Se observó desmetilación del ADN a los 30 días, que fue mayor en plantas tratadas con las dosis más altas y los mayores tiempos de exposición. Sin embargo, a los 100 días no se observaron diferencias entre tratamientos. Resumiendo, fue posible obtener plantas hipometiladas de S. commersonii a partir de semillas botánicas tratadas con 5´Azacitidina durante un período variable. La hipometilación inducida se revirtió durante el desarrollo de la planta, lo que indicaría que las plantas sufrieron un proceso de remetilación.