Estrategia para el control de la garrapata del bovino Desarrollo de una vacuna recombinante y optimización de su eficacia.

POGGIO, THELMA VERÓNICA; EDUARDO ALBERTO SCODELLER; JOSE LA TORRE

Mar del Plata

Jornada; 6tas. JORNADAS INTERNACIONALES DE VETERINARIA PRÁCTICA Pequeños y Grandes Animales; Producción Avícola; Bromatología y Tecnología de los Alimentos; 2010

Colegio de Veterinarios Provincia de Bs As

PARASITOLOGÍAEstrategia para el control de la garrapata del bovinoDesarrollo de una vacuna recombinante y optimización de su eficacia.Dra. POGGIO, Thelma , Dr. SCODELLER Eduardo, Dr. LA TORRE José.CEVAN-Centro de Ciencia y Tecnología ?Milstein?- Conicet. vpoggiocevan@centromilstein.org.arINTRODUCCIÓNEn Argentina la ?garrapata común del bovino? Boophilus microplus es considerada el ectoparásito endémico más importante de la zona, debido a las pérdidas económicas que ocasiona. La resistencia de la garrapata a los acaricidas creada en forma sucesiva y la resistencia cruzada a dos o más principios activos hace que el control basado solamente en el uso de garrapaticidas, además de los problemas de costo y ambientales no contribuya a solucionar el problema y por ello sería beneficioso disminuir su uso. Se propone que una forma de reducir de manera significativa la infestación y la incidencia de enfermedades hemoparasitarias transmitidas por la garrapata, es mediante la estrategia de inmunización activa del ganado bovino con antígenos ocultos recombinantes de garrapata combinados con un adyuvante oleoso en una única formulación optimizada.Los antecedentes nacionales como internacionales muestran que el desarrollo de una vacuna recombinante para el control de la garrapata es eficaz, provocando daño de la membrana intestinal, disminuyendo el número de sobrevivientes, el peso, la capacidad reproductiva y la oviposición (Willadsen y col, 1989, Rand y col, 1989, Rodriguez y col, 1994). Se pretende innovar sobre conocimientos existentes, buscando una mejora de eficacia del producto especialmente diseñado para su aplicación en zonas endémicas. Para eludir la heterogeneidad alélica dentro del lucus Bm86 entre los diferentes aislados y su correlación inversa con la eficacia de vacunación, se clonaron y secuenciaron aislados autóctonos de zonas endémicas de nuestro país por técnicas de ADN recombinante y se compararon con las secuencias publicadas y aquellas empleadas en las vacunas comerciales no disponibles en el pais. Se evalúo la inmunogenicidad del antígeno recombinante optimizado en un modelo experimental de laboratorio y en especies blanco.MATERIALES Y MÉTODOSSe aisló el ARN mensajero de Boophilus microplus a partir de larvas cedidas por el Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (Salta) y por el Centro Experimental Cambá Punta, SENASA (Corrientes). El ADNcopia amplificado fue utilizado como templado para la reacción de PCR usando oligonucleótidos correpondientes a la secuencia publicada de Bm86. El producto fue introducido en un vector de expresión procarionte y la secuencia nucleotídica de los clones recombinantes fue corroborada por secuenciación y comparada con los datos publicados.Evaluación de la inmunogenicidad: Dos grupos de 10 ratones Balb/c recibieron tres inmunizaciones vía intramuscular (semanas 0 - 4 -7). Un grupo sirvió como control y solo recibió el adyuvante oleoso PLUS VAC, el otro fue inmunizado con 5 μg/dosis del antígeno recombinante formulado con el mismo adyuvante.En otro ensayo, dos grupos de cinco bovinos recibieron tres inmunizaciones vía intramuscular (semanas 0 - 4 -7). Un grupo sirvió como control y solo recibió el adyuvante oleoso PLUS VAC y el segundo fue inmunizado con 100 μg/dosis del antígeno recombinante formulado con el mismo adyuvante.Los animales de ambos ensayos fueron sangrados a 0-63 dpv y la respuesta inmunológica fue analizada en muestras séricas por técnica de western blot .RESULTADOSEl antigeno recombinante de nuestra formulación, llamado ?BmSS? presenta un 100% de similitud con la proteína de superficie de la garrapata Rhipicephalus microplus de origen mexicano recientemente publicada por Canales y col, (2009) y con la variante Bm86 de la cepa Campo Grande de origen brasilero (Andreotti y col 2008). Difiere en un aminoácido con el antígeno Bm95 de la cepa argentina A (García-García y col, 1999) y presenta un 97% de identidad con la cepa Camcord Cubana (Vacuna Gavac) .Debido a la alta inmungenicidad del antígeno recombinante observada en los modelos experimentales murino y bovino, los resultados demuestran que los epitopes están presentes en la porción proteica del antigeno, ya que modificaciones post-traduccionales no son posibles en el sistema de expresión procarionte.Nuestra formulación optimizada resultó altamente inmunogénica, segura e inocua en el modelo murino y bovino.DISCUSIONEl fundamento inmunológico de la vacunación como herramienta para lograr el control de la infestación por garrapatas radica en que el antigeno recombinante induce una respuesta policlonal con un posible compromiso del complemento y otros mecanismos efectores. Por lo tanto, estos resultados permiten anticipar que, con el empleo de esta nueva formulación es posible introducir una estrategia de control efectivo anti-garrapata y disminuir, a mediano y largo plazo, la frecuencia de aplicación de compuestos químicos acaricidas, alentando a que los efectos obtenidos en este ensayo puedan ser mantenidos en el campo durante un ciclo parasitario estacional completo. CONCLUSIONES La introducción de estos productos, económicamente eficientes, ecológicos y de larga duración tiene como objetivo lograr controlar la infestación de garrapatas y disminuir el consumo elevado de garrapaticidas químicos en la temporada de garrapata, disminuir la presión de selección de genes resistentes, otorgar mayor vida útil de los acaricidas, disminuyendo a su vez, costos, residuos de pesticidas en leche y carne y contaminación ambiental.Nota: Este trabajo fue realizado en colaboración con el Laboratorio Tecnovax S.A.