INVESTIGADORES
TUROWSKI Valeria Rosana
congresos y reuniones científicas
Título:
Estrategia molecular para la edición génica de la isoforma ROP5CI codificada en el locus polimórfico VIR1 de Toxoplasma gondii
Autor/es:
TUROWSKI VR.; CORVI MM.; ANGEL SA.; RUIZ DM.
Lugar:
Mendoza
Reunión:
Congreso; XI Congreso de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2022
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Protozoología
Resumen:
El desarrollo de la infección producida por Toxoplasma gondii depende en gran medida de las diferencias alélicas de los efectores que el parásito secreta en el célula hospedadora. Las cepas de T. gondii pueden ser clasificadas en tres linajes de acuerdo a su letalidad en ratones de laboratorio siendo las de tipo I altamente virulentas, las de tipo II de virulencia intermedia y las de tipo III avirulentas. Entre los mayores determinantes para la virulencia se encuentra el locus ROP5, también denominado locus VIR1, el cual consta de un grupo de 4 a 10 genes duplicados en tándem que codifican pseudoquinasas polimórficas localizadas en las roptrias del parásito. ROP5 junto a las quinasas ROP17 y ROP18 son inyectadas durante la invasión y bloquean la respuesta de defensa de la célula hospedadora permitiendo la replicación intracelular de T. gondii. Las isoformas virulentas de ROP5 (ROP5BI y ROP5CI), localizadas en la membrana de la vacuola parasitófora, inducen cambios conformacionales en las GTPasas murinas relacionadas a la inmunidad (IRGs) bloqueando su oligomerización y exponiendo residuos que son fosforilados por las quinasas ROP17 o ROP18, desactivando así la parte de los mecanismos de la inmunidad innata. A fin de avanzar en el estudio de cómo se establece y desarrolla la toxoplasmosis aguda, y con el objetivo particular de caracterizar la isoforma virulenta ROP5CI, de diseñó una estrategia para editar el gen de interés localizado en el locus VIR1. Utilizando la técnica CRISPR/Cas9 se establecieron líneas clonales de parásitos expresando la proteína ROP5CI fusionada al epítopo HA. Además se obtuvieron parásitos con una versión mutada de la proteína ROP5CI en un residuo de cisteína con elevada probabilidad de ser modificado por palmitoilación. Este trabajo fue financiado con el subsidio PICT 2017-2488.
