Cuantificación de la actividad enzimática y amplificación de fragmentos génicos de lacasa y manganeso peroxidasa en Peniophora spñ

FONSECA MI, MR TEJERINA, AB RAMOS, NI SANABRIA, JI FARIÑA LL VILLALBA, PD ZAPATA.

Tucumán

Congreso; XXXVIII Congreso Argentino de Genética; 2009

Resumen Cuantificación de la actividad enzimática y amplificación de fragmentos génicos de lacasa y manganeso peroxidasa en Peniophora sp FONSECA MI1, MR TEJERINA1, AB RAMOS1, NI SANABRIA1, JI FARIÑA2, LL VILLALBA1, PD ZAPATA1. 1 Laboratorio de biotecnología Molecular. FCEQyN. UNaM. 2 Departamento de Biotecnologia Fungica. PROIMI-CONICET. bcmb@fceqyn.unam.edu.ar Los hongos de pudrición blanca presentan un amplio espectro de enzimas como lacasa (Lac) y manganeso peroxidasa (MnP), con aprovechamiento biotecnológico en procesos como el biopulpado, bioblanqueo y biorremediación. El objetivo del trabajo fue cuantificar esta actividad enzimática y obtener un fragmento de los genes de lac y mnp del hongo de pudrición blanca Peniophora sp. Para ello Peniophora sp fue cultivado en medio liquido (extracto de malta 12.7 g/L, extracto soluble de maíz 5 g/L pH 3,5) por 7, 10 y 14 días de 25°C en condiciones estáticas.  La actividad enzimática lacasa se determino por electrofotometria a 469 nm usando como sustrato 2,6-dimetoxifenol 5mM en buffer acetato de sodio 0.1M (pH 3,6) y la MnP  a 610 nm usando rojo fenol 0,1M en buffer succinato 0,1M (pH 4,5). El análisis estadístico fue realizado mediante el programa GraphPad  prisma4. Para la amplificación por PCR se extrajo DNA de micelios. No se observo diferencias significativas (P>0.05) en la actividad enzimática entre los distintos días. La actividad lacasa fue de 60U/L y la de MnP de 45U/L. Por otro lado se obtuvieron amplicones de 200pb y 300pb para la lac y mnp respectivamente que fueron secuenciados. El análisis fue realizado con megablast mostro una identidad de 83% para lac y de 96% para mnp con otros hongos de pudrición blanca. Las secuencias génicas son fundamentales para analizar la regulación a nivel genético de estas enzimas y evaluar posibles inductores para incrementar la producción.