Efecto del cobre sobre la secreción de enzimas ligninolíticas de Ganoderma applanatum cepa A

TEJERINA MARCOS RAUL; FONSECA MARIA ISABEL; VILLALBA LAURA ; ZAPATA PEDRO

Congreso; XII congreso argentino de microbiología. VI congreso de la sociedad argentina de bacteriología micología y parasitología clínica ? SADEBAC I congreso de microbiología agrícola y ambiental; 2010

Introducción: Ganoderma applanatum, es un hongo ligninolítico, que presenta un amplio espectro de enzimas como, la lacasa (Lac) y manganeso peroxidasa (MnP), aplicables en diversosprocesos como lo son el bioblanqueo, biopulpado y generación de biocombustible. Objetivo: Analizar el efecto del cobre sobre la actividad enzimática (Lac y MnP), el crecimiento en biomasay la secreción de proteínas totales en G. applanatum. Materiales y métodos: la cepa A de G. applanatum BAFC1168 fue inoculada en medio de cultivo líquido (extracto de malta 12,7 g/L y extracto soluble de maíz 5 g/L) durante 7, 10 y 14 días; con 0,2 mM, 0,5 mM y sin CuSO4. La cuantificación de la actividad enzimática de Lac y MnP fue determinada por espectrofometría, utilizando como sustrato DMP (2,6-dimetoxifenol) y MnSO4 respectivamente.Las proteínas totales se cuantificaron mediante la técnica de Bradford, utilizando como solución patrón la albúmina sérica bovina. El crecimiento en biomasa se determinó como peso seco delmicelio. El análisis estadístico se realizó mediante el programa estadístico GraphPad Prism 5. Para la detección de isoenzimas Lac fueron sembrados 20 μg de proteína por muestra enzimogramas no desnaturalizante (ND-PAGE al 7,5%). El revelado se realizó sumergiendo el gel en una solución conteniendo DMP 5 mM en buffer acetato 0,1 M, pH 3,6 hasta la aparición debandas. El peso molecular de las isoenzimas fue determinado en geles desnaturalizante SDS-PAGE. Resultados: el efecto del cobre fue significativo (p<0,001) tanto en el crecimiento en biomasa como en la secreción de proteínas, produciendo un efecto negativocon el transcurso de los días. El cobre produjo un incremento de actividad enzimática Lac (p<0,001) en concentraciones de 0,2 mM, mientras que en la actividad MnP no produjo un efectosignificativo (p>0,05). Se determinó que el cobre induce isoenzimas Lac que van desde los 70 hasta los 127 kDa. Conclusiones: el cobre produjo un efecto negativo en el crecimiento enbiomasa y secreción proteica, mientras que produjo un efecto positivo en la actividad enzimática Lac, no así en la actividad MnP. El agregado de cobre también produjo la inducción de isoenzimas Lac. Estos resultados motivan a profundizar los estudios incluyendo otras variables para obtener producción enzimática a gran escala y aplicarlas biotecnológicamente a la industria celulósicapapelera o a la primera fase de fabricación de biocombustible.