BECAS
TEJERINA marcos raul
congresos y reuniones científicas
Título:
DISEÑO DE CEBADORES DEGENERADOS PARA EL FACTOR DE TRANSCRIPCION ACE-1 Y DETERMINACION DE ISOENZIMAS INDUCIBLES CON Cu+2 EN Peniophora sp
Autor/es:
FONSECA MARIA ISABEL; RAMOS ANA BELEN; TEJERINA MARCOS RAUL; FARIÑA JULIA
Reunión:
Congreso; XIV congreso latinoamericano de Genética; 2010
Resumen:
Peniophora sp presenta enzimas ligninolíticas como la Lacasa (Lac) inducible con Cu+2 y posiblemente regulado por el factor de transcripción ACE-1.Objetivo: diseñar cebadores para amplificar el gen ace-1 en Peniophora sp y determinar el perfil isoenzimático en cultivos inducidos con Cu+2.Para diseñar los cebadores se contrastó la secuencia aminoacídica de ACE-1 de Phanerochaete chrysosporium mediante el BLASTp. Se seleccionó y alineó las secuencias similares utilizando el T-Coffee. Con la secuencia consenso se diseñaron los cebadores degenerados y el análisis in silico se realizó mediante el programa Primer3. El hongo se inoculó en medio líquido extracto de malta 12,7 g/L-extracto soluble de maíz 5 g/L 29ºC pH 4,6 por 7, 10 y 14 días, con o sin el agregado de 0,02 mM, 0,1 mM y 0,3 mM de Cu2SO4. La proteínas secretadas se determinaron por el método de Bradford y se analizó el perfil isoenzimático en geles SDS-PAGE 7,5% revelados con 2,3-dimetoxifenol 5 mM en buffer acetato 0,1 M pH 3,6.Se obtuvieron cebadores con 16% de degeneración. Se revelaron dos isoenzimas de 60 y 75 kDa. Estos resultados demuestran la capacidad del cobre para inducir una respuesta de isoenzimas de Lac.