Determinación de la actividad enzimática lacasa en Pleurotus-sajor-caju inducido por sulfato de cobre

TEJERINA MARCOS RAUL; RAMOS ANA BELÉN; FONSECA MARIA ISABEL

Jornada; III Jornadas Nacionales de estudiantes de Biología; 2009

Los hongos causantes de pudrición blanca son los únicos organismos capaces de degradar eficientemente la lignina. Este proceso se debe a que estos poseen un sistema enzimático oxidativo que ataca la molécula de lignina. Las enzimas ligninolíticas más importantes descritas hasta el momento son: manganeso peroxidasa, lignina peroxidasa, lacasa, las cuales existen en diferentescombinaciones. Estas enzimas pueden ser reguladas por diversos factores, como los metales pesados entre los cuales se encuentra el cobre, cuya influencia sobre la producción de enzimas ligninolíticas ha sido estudiada extensamente en diversas especies. Con la utilización de estos sistemas enzimáticos la industria se ha favorecido con estos avances biotecnológicos logrando optimizar los procesos tecnológicos con un menor impacto ambiental.En este sentido el objetivo del presente trabajo fue detectar y cuantificar la producción de lacasa inducida por sulfato de cobre (SO4Cu) y su efecto sobre el crecimiento de Pleurotus sajor-caju.El hongo fue crecido a 29º C en 50 ml de medio extracto de malta 12,7 g/l, extracto soluble de maíz 0,5 % con el agregado de 0,5 mM, 1 mM o sin SO4Cu durante 5, 7, 10 y 14 días. Cada día se separó el micelio para la determinación de biomasa y el sobrenadante para la cuantificación proteica por medio del método de Bradford, además se cuantificó la actividad lacasa por espectrofotometría a 469 nm usando como sustrato 2,6?dimetoxifenol y se caracterizó la enzima mediante geles de poliacrilamida desnaturalizantes y no desnaturalizantes. El análisis estadístico fuerealizado mediante el programa GraphPad Prism 4.El día de mayor crecimiento fue el 14 en todos los tratamientos ensayados. El día de mayor actividad enzimático para todos los tratamientos fue el 10mo, siendo 53 U/L para el medio sin cobre, 121 U/L para 0.5 mM y 68 U/L para 1 mM. Las diferencias fueron significativas (p<0,001) en los días 10 y 14 entre los tratamientos con y sin cobre, siendo mayor la actividad lacasa en los tratamientos con cobre. En los geles fueron observadas dos isoenzimas una de 74kDa y otra de mayor peso de 163kDa.Estos resultados confirman la importancia de la presencia de metales como elcobre en la inducción enzimática por lo que es fundamental avanzar sobre elconocimiento de la regulación a nivel genético de la trascripción y la traducción deenzimas ligninolíticas.