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Culicoides Latreille es el género más diverso de la Familia Ceratopogonidae e incluye muchas especies que actúan como vectores de patógenos que causan enfermedades en el hombre y animales domésticos. Los ejemplares adultos se caracterizan por su pequeño tamaño, miden entre 1.5 a 3 mm de longitud, y la identificación específica se realiza principalmente en base a caracteres morfológicos; sin embargo, las herramientas de biología molecular actualmente proveen métodos eficientes para la identificación de especies. Tanto en la taxonomía morfológica como en la molecular, los mejores resultados se obtienen con material recién colectado, por lo cual es necesario buscar alternativas para mejorar el rendimiento de aquellas muestras que están conservadas en alcohol por largos períodos de tiempo. Desde la perspectiva molecular, la reacción en cadena de la polimerasa anidada (PCR) o Nested-PCR, se utiliza en situaciones en las cuales es necesario aumentar la sensibilidad o la especificidad de la PCR. Esta técnica consiste en dos reacciones de amplificación secuenciales, cada una de las cuales utiliza un par diferente de cebadores. El producto de la primera reacción de amplificación se utiliza como molde para la segunda PCR. El objetivo del trabajo es estandarizar una técnica de PCR anidada para aumentar la amplificación de especímenes de Culicoides conservados en alcohol 70% por más de 8 años. La PCR se optimizó en un volumen final de 12,5 µL, en la primera ronda de amplificación se trabajó con los siguientes cebadores: LCO1490-CulCOIR, mientras que en la segunda ronda se usó CulCOIF-HCO1298. El uso de dos pares de oligonucleótidos permite realizar un mayor número de ciclos, aumentando así la sensibilidad de la PCR. Esta técnica es altamente reproducible y permite amplificar ADN de calidad a partir del cual se obtuvo la secuencia barcode de varias especies de Culicoides, aportando nuevas herramientas al estudio e identificación molecular del género.

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