Variabilidad del gen p25 (CP) entre aislamientos argentinos de CTV (cítrus tristeza virus)

ROBLEDO, GERMÁN; GAGO-ZACHERT, SELMA P.; COSTA, NORMA; SEMORILE, LILIANA C.; GRAU, OSCAR

Curitiba

Jornada; VII Jornadas de Jovens Pesquisadores; 1999

Grupo Montevideo

La tristeza, causada por CTV (citrus tristeza virus) constituye la enfermedad más destructiva de los cítricos. El genoma viral es un ssRNA de sentido positivo y 19,5 kb. La cápside está compuesta por dos proteínas dispuestas helicoidalmente alrededor del RNA genómico, una de 25 kDa (CP), que cubre un 95% de la partícula viral y otra de 27 kDa (dCP), presente sólo en uno de los extremos. Los aislamientos de CTV son poblaciones´ complejas de diferentes RNAS genómicos que varían ampliamente en sus características biológicas, tales como transmisibilidad por áfidos o síntomas causados en las especies hospedadoras y se desconocen aún las regiones genómicas involucradas en la expresión de estas características. Sin embargo, la generalidad de los aislamientos virales consta de una secuencia master mayoritaria en la población Y determinante del biotipo del mismo. El biotipo predominante en los aislamientos virales de una zona citrícola determina las estrategias a emplear para el control de la enfermedad. Esto evidencia la necesidad de conocer la variabilidad molecular de CTV en distintos aislamientos, a través del análisis de distintas regiones genómicas. Con este propósito se evaluó, por la técnica de polimorfismo de conformación de DNA monocatenario (SSCP), la variabilidad en el gen p25 (CP), en once aislamientos argentinos de diferentes orígenes geográficos y hospedadores cítricos. Dichos aislamientos se caracterizaron biológicamente por inoculación en especies cítricas indicadoras y se asignaron al correspondiente biogrupo de los cinco definidos (I a V, incrementando en severidad) para este complejo viral. Para cada aislamiento se obtuvo el CDNA del gen p25 por trascripción reversa, se lo amplificó por PCR y luego del clonado se realizó el análisis de diez clones. Cada clon se digirió con E515 II y se efectuó el análisis, por SSCP, de cada uno de los dos fragmentos resultantes. Para cada aislamiento se obtuvo un número variable de perfiles diferentes de SSCP Y de porcentaje del perfil mayoritario (heterogeneidad intrapoblacional). Se secuenciaron la totalidad de los clones correspondientes a los perfiles mayoritarios y también algunos de los minoritarios. La comparación, entre aislamientos, de las secuencias mayoritarias mostró una homología mayor al 98% en nucleótidos Y superior al 97% en aminoácidos deducidos. Pese a que los aislamientos analizados pertenecen a cuatro de los biogrupos (II a V) todos presentaron la secuencia del epítope reconocido por el anticuerpo monoclonal MCA15, que evidencia aislamientos severos. Los resultados sugieren una elevada estabilidad genética para el gen p25 de CTV.