PCR-RFLP para discriminacao de fungos da seccao Nigri productores de ocratoxina A

FERRACIN, LARA MUNIQUE; SARTORI, DANIELE; SCHAPOVALOFF, MARIA ELENA; RIBEIRO, RENAN; OLIVEIRA, ANDRÉS; FUNGARO, MARIA HELENA; MORELLO, LUIS; LUNARDI, LIGIA

San Paulo

Congreso; Congreso de Genética de Microrganismos; 2006

Departamento de Genética

Ocratoxina A (oa) é um metabólito secundário com propiedades nefrotóxicas, imunossupresoras, genotóxicas e teratogênica, produzida por algumas espécies de Aspergillus. Dentre as espécies de Aspergillus produtoras de OA, inclui-se o fungo Aspergillus foetidus, pertenece a secção Nigri. Fungos desta secção se caracterizam por produzirem esporos de coloração marrom escuro a negros. A taxonomia dos fungos de esta secção, constitui-se em uma das mais complexas e confusas do gênero, tendo como base o uso de características morfológicas e culturais. A. foetidus compõe o chamado ?agregado níger? e tem sido descrito como productor de OA, entretanto, este fungo não se diferencia morfologicamente de A. tubingensis. A literatura é contraditória quanto à capacidade ou não de A. tubingensis produzir octaoxina A. Parte desta controversa é decorrente da dificultade de identificar corretamente estas espécies. Este trabalho teve por objetivo o establecimiento de metodologia molecular na distinção de A. foetidus e A. tubingensis. Isolados provenientes da Argentina, Espanha, Turquia e Brasil tiveram parte do gene da beta tubulina sequenciada. O alinhamento das sequências obtidas através do programa ClustalX revelou diferenças entre A. foetidus e A. tubingensis. A análise in sílico das sequências obtidas neste trabalho,bem como, de sequências depositadas no GenBank, permitiu detectar um sítio de restrição para a enzima SalI (G/TCGAC), presente no fragmento amplificado de A. foetidus e ausente em todas os isolados de A. tubingensis. A amplificação parcial do gene da beta-tubulina e posterior restrição com SalI mostrou-se uma metodologia precisa, pois permitiu discriminar 12isolados de A. foetidus e 20 de A. tubingensis a partir de um conjunto de 32 Aspergillus coletados de amostras de café e frutas secas.