Caracterización de un cepario de levaduras para uso enológico mediante técnicas moleculares

CHIMENO V.; SANCHEZ M.L.; PALADINO S.; MAZA M.; BERNARDI M.; FARRANDO S.; COMBINA M.; MERCADO L.

San Juan

Simposio; II Simposio Argentino de Viticultura y Enología; 2014

INTA, COVIAR, OIV, otros

Saccharomyces cerevisiae es reconocida como la levadura vínica por excelencia. La Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de Cuyo posee una colección de levaduras vínicas conformada por 445 cepas provenientes de Departamentos de importancia vitivinícola de la provincia de Mendoza como Luján de Cuyo, Tupungato, Maipú, San Martín, Junín y Rivadavia. La finalidad de esta colección es disponer de material para su uso de acuerdo a diferentes objetivos enológicos, esto requiere tener una amplia información respecto de las características de las cepas que integran la misma. Los microorganismos aislados fueron identificados por sus características fenotípicas (formación de esporas y crecimiento en agar lisina), tecnológicas (formación de película, anillo o sedimento, resistencia al alcohol, resistencia al SO2, formación de espuma) y cualitativas (formación de ácido a partir de la glucosa, producción de H2S, actividad β-glucosidasa) para ser seleccionados en función de objetivos particulares. En base a esto las cepas fueron agrupadas por su semejanza. La caracterización completa de una colección de microorganismos requiere la inclusión de marcadores moleculares que permitan identificar, comparar y agrupar los miembros de la misma. Con este objetivo se seleccionaron representantes para ser estudiados mediante técnicas moleculares. Se realizó la extracción de ADN total mediante metodología química utilizando fenol/cloroformo/isoamílico y se verificó la calidad del ADN por electroforesis en gel de agarosa. De un total de 58 cepas analizadas se encontraron 44 patrones diferentes según la técnica de diferenciación intraespecífica para Saccharomyces cerevisiae PCR Interdelta. Se observó la presencia de patrones repetidos para diferentes cepas de la colección. Al patrón N° 1 correspondieron cinco cepas del departamento de Tupungato y al patrón N°5 refirieron 11 individuos provenientes de los departamentos de Lujan, Maipú, Junín, Rivadavia y San Martín; en las demás levaduras se obtuvieron patrones únicos. Para confirmar si las levaduras que presentaron un perfil de bandas similar pertenecen a cepas similares o diferentes se analizó el polimorfismo de longitud de los fragmentos de restricción del ADN mitocondrial (Diferenciación intraespecífica de S.cerevisiae por RFLP ADN mitocondrial); obteniéndose diez nuevos patrones. Solo dos cepas pertenecientes al departamento de Tupungato muestran similitudes en su perfil de bandas por ambas técnicas. Por otro lado, tanto en el patrón I como en el II mitocondrial se agruparon cepas previamente clasificadas con distintos patrones interdelta lo que nos indicaría que estas cepas son similares pero no idénticas y probablemente comparten un parentesco cercano.