Estudio de Sensibilidad de Levaduras Lipodependientes Mediante el Método de Microdilución en Caldo

ROJAS FLORENCIA D.; GUSTAVO E GIUSIANO

Campus Universitario, Corrientes.

Jornada; Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2010; 2010

Secretaría General de Ciencia y Técnica

El género Malassezia es reconocido como miembro de la biota cutánea normal del hombre y los animales. Por influencia de ciertos factores estas levaduras pueden volverse patógenas y participar en diversos tipos de afecciones dérmicas. También han adquirido importancia como patógenos emergentes capaces de producir infecciones sistémicas en inmunocomprometidos como inmunocompetentes. La variabilidad y los estrictos requerimientos nutricionales de este género es la razón por la cual es escaso el conocimiento sobre la actividad in vitro de los antifúngicos frente a estas especies. Por la alta incidencia de afecciones que involucra a Malassezia y la respuesta variable a los tratamientos, en necesario contar con un método de estudio de la sensibilidad del género.El objetivo fue introducir modificaciones a una técnica de referencia de la CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) para aplicar al estudio de la sensibilidad de levaduras lipodependientes y determinar la actividad in vitro de drogas azólicas de uso habitual frente a levaduras del género Malassezia.Las distintas cepas de Malassezia spp. previamente genotipificadas por PCR-RFLP fueron repicadas en Agar Dixon modificado e incubadas a 32ºC hasta 5 días. Se introdujeron variantes a la metodología del método microdilución en caldo (M27 A3) estandarizado por el CLSI. Se adicionaron suplementos al medio base para permitir el desarrollo de éstas levaduras. Se determinó la CIM (Concentración Inhibitoria Mínima) para ketoconazol y fluconazol. Cepas de referencia: Candida krusei ATCC 6528 y Candida parapsilosis ATCC 22019.Se estudiaron 55 levaduras: 24 Malassezia furfur, 19 M. sympodialis, 12 M. globosa. El medio base suplementado permitió buen desarrollo de las levaduras. Los tiempos de incubación requeridos para la lectura de CIM dependió de las especies: M. furfur y M. sympodialis fueron leídos a partir de 72 horas de incubación y M. globosa no puedo ser determinados sino a partir del 5° día. El 91% de las cepas presentó valores de CIM para ketoconazol menores a 0.06 µg/ml y para el 9% restante los valores no superó 0.5 µg/ml.Los valores de CIMs para fluconazol dependieron de la especie. M. furfur presentó valores dentro del rango 16-0.25 µg/ml, pero el 80% de las cepas mostraron valores de 4 µg/ml a 1 µg/ml. El rango de M. sympodialis fue de 4 - 0.125 µg/ml, con un 68% de las cepas con valores de 1 a 0.25µg/ml. El rango de M. globosa fue 4 - 0,06 µg/ml con el 75 % de las cepas con CIMs de 1 a 0.25 µg/ml. Las modificaciones introducidas al método de referencia permitieron el desarrollo de las levaduras lipodependientes y el estudio de sensibilidad. Se observaron distintos tiempos de incubación para las diferentes especies, que es importante definir porque valor de la CIM depende de una buena lectura del punto de corte.Ketoconazol muestra buena actividad inhibitoria frente a las especies más frecuentes. La actividad de Fluconazol presenta mayor variabilidad y dependen la especie. M.furfur fue la especie que mostró CIMs más altas para este antifúngico, coincidente con lo demostrado en otros estudios.