CONCENTRACIÓNDE CELULASAS SECRETADAS POR LENZITES ELEGANS AUTÓCTONO DE LA PROVINCIA DE MISIONES PARA LA PRODUCCIÓN DE BIOETANOL

RODRÍGUEZ, M. D.; SEDLER, C. I.; PRIGIONI, G. A.; ZAPATA, P. D.; VILLALBA, L. L.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Micología 2014, XXIII Jornadas Argentinas de Micología, 1ra. Reunión de la Asociación Micológica Carlos Spegazzini; 2014

Asociación Micológica Carlos Spegazzini

En el contexto mundial actual en el que se observa un aumento sostenido del consumo energético es de gran importancia el desarrollo de tecnologías para la producción competitiva de biocombustibles de segunda generación. La etapa limitante de este proceso es la etapa de sacarificación de material lignocelulósico debido al costo de las enzimas celulasas que se requieren en grandes cantidades para maximizar el rendimiento de la degradación de celulosa. En este trabajo se propone utilizar una cepa fúngica autóctona de la provincia de Misiones, Lenzites elegans BAFC 2127, secretora de celulasas. Para esto se realizaron dos estrategias de concentración de las celulasas. Con el propósito de aumentar las actividades enzimáticas, se realizó la activación del hongo durante 5 días en placa, se lo repicó luego en un medio líquido (Mandels suplementado con glucosa) y finalmente se cultivó el hongo en medio líquido (Mandels suplementado con aserrín de pino y eucalipto). A partir del extracto crudo del medio de cultivo, se realizó la precipitación salina y la concentración con centricón. En la primera, se evaluaron distintos porcentajes de saturación con sulfato de amonio a fin de realizar una precipitación fraccionada de las proteínas presentes en el extracto. Los porcentajes de saturación ensayados fueron 20, 40, 60 y 80 %. Las fracciones solubles e insolubles de cada etapa fueron separadas por centrifugación a 4°C. El segundo método de concentración utilizado fue el de centrifugación. Se utilizó un centricón Spin X UF20 capaz de retener moléculas de masa molecular superiores a 10 KDa. Finalmente se realizó la determinación de actividad enzimática de endoglucanasas, papel de filtro, celobiohidrolasas y B-glucosidasas con el fin de evaluar la retención de cada enzima. La actividad para papel de filtro presentó un aumento de 2,76 y 2,4 veces respecto al extracto crudo en la fracción soluble al 60% de saturación y en la fracción retenida del centricón, respectivamente. La actividad B-glucosidasa aumentó 2 y 3 veces respecto al extracto crudo en la fracción insoluble al 60% de saturación y en la fracción retenida del centricón. Las actividades de celobiohidrolasa y endoglucanasa no presentaron aumentos significativos de actividad en las distintas etapas. Estos resultados permiten establecer una metodología sencilla y económica para la concentración de B-glucosidasa y enzimas con actividad frente a papel de filtro producidas por L. eleganspara su posterior utilización en la etapa de sacarificación en la producción de bioetanol.