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La inmovilización de enzimas producidas por hongos nativos abre las puertas a bioprospecciones concretas, tanto en lo que se refiere a los procesos productivos como al tratamiento de efluentes que contienen grasas y aceites, siendo los efectos de la inmovilización enzimática la estabilización del biocatalizador, la reutilización bajo las condiciones del procedimiento y la purificación del producto, que de manera general mejoran la economía de un proceso. El objetivo del presente trabajo fue inmovilizar esterasas (EC. 3.1.1.3) producidas por la cepa P. rubens LBM81 en nanopartículas magnéticas. La cepa P. rubens LBM81, nativa de la provincia de Misiones, fue activada en medio MEA y, luego de un periodo de crecimiento de 7 días, utilizada en la preparación de una suspensión de esporas de concentración igual a 1,2x106 esporas/mL para la inoculación de 6 Erlenmeyer de 100 mL conteniendo cada uno 20 mL de medio de cultivo compuesto por peptona de carne (2% p/v) y aceite de oliva (4% p/v). Los Erlenmeyer inoculados se sometieron a agitación constante durante 6 días, a una temperatura de 30 °C y a una velocidad de 140 rpm, finalizado este período se filtró el contenido para obtener el extracto enzimático y, a partir de este, se efectuó la primera determinación de actividad esterasa. Las nanopartículas de ferrita de cobalto (CoFe2O4) se obtuvieron a partir de soluciones en relaciones estequiométricas de sales de hierro y cobalto, las cuales fueron mezcladas y colocadas en un embudo para ser goteadas en una solución de NaOH bajo agitación constante. Para finalizar la síntesis de nanopartículas, se efectuaron tres ciclos de centrifugado, separando y descartando el sobrenadante. Las nanopartículas sintetizadas se dispersaron para su funcionalización con APTES (3-aminopropiltrietoxisilano), luego fueron recogidas mediante un campo magnético externo y se lavaron con agua desionizada y etanol. La inmovilización de esterasas se llevó adelante agregando glutaraldehído 25% a las nanopartículas magnéticas funcionalizadas, seguidamente se mantuvo la mezcla durante 2 h bajo agitación constante, se lavaron las nanopartículas y se mezclaron con 2,5 mL de buffer fosfato 0,1 M pH 7 y 2,5 mL de extracto enzimático de 962 ± 128 U/mL. La mezcla se mantuvo durante 2 h bajo agitación, se recuperó el precipitado y se lavó con buffer fosfato 0,1 M pH 7 varias veces para ser utilizado directamente en las mediciones de actividad esterasa. La actividad esterasa de las enzimas inmovilizadas en las nanopartículas magnéticas se determinó mediante espectrofotometría a 405 nm utilizando como sustrato el p-nitrofenil palmitato. Los resultados obtenidos nos permitieron observar que las nanopartículas de ferrita de cobalto sintetizadas, y funcionalizadas con APTES, inmovilizaron a las enzimas producidas, obteniéndose 10 ± 3 U/g de actividad esterasa.

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