Estrategia molecular para la edición génica de la isoforma ROP5CI codificada en el locus polimórfico VIR1 de Toxoplasma gondii

TUROWSKI VR; CORVI MM; ANGEL SA; RUIZ DM

Mendoza

Congreso; XI Congrso de la Sociedad Argenitna de Protozoología; 2022

Sociedad Argenitna de Protozoología

El desarrollo de la infección producida por Toxoplasma gondii depende en gran medida de las diferencias alélicas de losefectores que el parásito secreta en el célula hospedadora. Las cepas de T.gondii pueden serclasificadas en tres linajes de acuerdo a su letalidad en ratones delaboratorio siendo las de tipo Ialtamente virulentas, las de tipo II de virulencia intermedia y las de tipo IIIavirulentas. Entre los mayores determinantes para la virulencia se encuentra ellocus ROP5, también denominado locus VIR1, el cual consta de un grupo de 4 a10 genes duplicados en tándem que codifican pseudoquinasas polimórficaslocalizadas en las roptrias del parásito. ROP5 junto a las quinasas ROP17 y ROP18 son inyectadas durante la invasión y bloquean la respuesta de defensa de la célulahospedadora permitiendo la replicación intracelular de T. gondii. Las isoformas virulentas de ROP5 (ROP5BI y ROP5CI), localizadasen la membrana de la vacuola parasitófora, inducen cambios conformacionales enlas GTPasas murinas relacionadas a la inmunidad (IRGs) bloqueando suoligomerización y exponiendo residuos que son fosforilados por las quinasasROP17 o ROP18, desactivando así la parte de los mecanismos de la inmunidad innata.A fin de avanzar en el estudio de cómo se establece y desarrolla la toxoplasmosisaguda, y con el objetivo particular de caracterizar la isoforma virulenta ROP5CI,de diseñó una estrategia para editar el gen de interés localizado en el locus VIR1. Utilizando la técnica CRISPR/Cas9 seestablecieron líneas clonales de parásitos expresando la proteína ROP5CIfusionada al epítopo HA. Además se obtuvieron parásitos con una versión mutadade la proteína ROP5CI en un residuo de cisteína con elevada probabilidadde ser modificado por palmitoilación.