INVESTIGADORES
ROMANUTTI carina
congresos y reuniones científicas
Título:
CLONADO, EXPRESIÓN Y PURIFICACION DE LA NUCLEOPROTEINA DE UNA CEPA ARGENTINA DEL VIRUS DISTEMPER CANINO, CON POTENCIAL APLICACIÓN EN EL DESARROLLO DE INMUNOGENOS DE NUEVA GENERACION
Autor/es:
GALLO CALDERÓN MARINA; ROMANUTTI CARINA; BOADO LORENA; KELLER LETICIA; LA TORRE JOSÉ
Lugar:
La Pampa. Argentina
Reunión:
Jornada; XIII Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2021
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria
Resumen:
El Virus Distemper Canino (VDC), se encuentra distribuido en todo el mundo, afectando a mascotas y a especies silvestres. Si bien existen vacunas atenuadas, en los últimos años, se ha registrado en todo el mundo, un aumento de casos de Distemper (tanto en animales vacunados como en no vacunados). Dada la falta de actualización de las cepas vacunales, y al poseer un genoma a ARNsc, (con alta tasa de mutación), surgen cepas emergentes pobremente protegidas por los anticuerpos vacunales.En el ICT Milstein se realiza el diagnóstico molecular del VDC, lo cual nos permite estudiar las cepas salvajes circulantes. A raíz de ello, nos hemos propuesto el desarrollo de inmunógenos de nueva generación, para lograr un mejor y efectivo control de esta enfermedad. El objetivo del presente trabajo fue clonar, expresar y purificar la NP, para iniciar su estudio como inmunógeno, en el modelo murino.Pudimos amplificar por PCR el gen completo de la nucleoproteína (NP) de una cepa local, el cual fue clonado en pGemT y luego sublonado en el vector pRSET-B. Se indujeron cultivos de E. ColiBL21 con 1 mM de IPTG en medio LB, 5 horas a 37°C. Estos fueron sonicados y la NPr purificada obteniéndose una concentración de 0.4 mg/ml.Se puso a punto un ELISA con sueros caninos y un anticuerpo monoclonal anti NP y se determinó 0.25 ug/ml de NPr adsorbida en la placa, como óptima concentración para utilizar posteriormente.Por otro lado, ratones fueron inmunizados intraperitonealmente con 3 dosis de 10 μg de NPr purificada más adyuvante o con PBS. Los títulos obtenidos en ELISA en ratones inmunizados con NPr fueron significativamente mayores (3.7) a los inmunizados con PBS (1.7).Si bien estos resultados son preliminares, obtuvimos y purificamos NPr, utilizándose como inmunógeno en el modelo murino.