Viabilidad de macrófagos alveolares homólogos transferidos por instilación nasal en un modelo experimental murino

BOTTINO E; PONCE AA; GATTI G.; LAGARES C.

Córdoba

Jornada; XXII Jornadas Científicas de Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

Los macrófagos alveolares (MA) constituyen uno de los sistemas de defensa del pulmón contra patógenos y partículas. Nuestro objetivo fue obtener MA por lavado bronquioalveolar (BAL) de la cepa C57BL/6 y transferirlos por instilación nasal al pulmón en ratones homólogos y evaluar su viabilidad. Los MA obtenidos por BAL del donante (D) se suspendieron en DMEM y fueron incubados en placas en una estufa termostatizada. Posteriormente las células del D fueron expuestos a tinta china (1:50) durante 2 h. Las mismas fagocitaron el material, para la posterior distinción entre células provenientes del D (marcadas) y las células del receptor (R) (no marcadas) en el conteo celular, en microscopio invertido. Una alícuota del D fue transferida por instilación nasal al pulmón de R de la misma cepa y sexo. Al cabo de 3 h los MA obtenidos por BAL del R se cultivaron durante 24 h y se realizó la identificación de células marcadas vs. no marcadas. La viabilidad celular (VC) se evalúo mediante tinción supravital (Azul de Tripan, 0,4%), un número no menor a 200 células fue contabilizado. Para la corroboración de la identificación de los MA extraídos por BAL se utilizó citometría de flujo, con los siguientes marcadores para MA: F4/80 (+), CD 11c(+), CD68 (+), SIGLEC (F+), CD 11b(-). Se utilizó el test de Duncan y ANAVA para la comparación de las medias, usando el software InfoStat (2017). Los resultados son expresados en porcentajes, MEDIA ± EE y los valores de p