Mecanismos antiproliferativos activados por calcitriol y drogas que deplecionan glutatión en células de cáncer de mama en cultivo

BOHL L; GUIZZARDI S; TOLOSA DE TALAMONI N; PICOTTO G.; RODRIGUEZ V

Jornada; Jornadas de Investigación Científica (JIC) de la Facultad de Ciencias Médicas, UNC; 2017

Introducción:El 1,25 (OH)2D3 o calcitriol (D), metabolito activo de la vitamina D, además desus conocidos efectos sobre la homeostasis del calcio y del fósforo, regula la proliferación, diferenciación, angiogénesis y muerte en células de cáncer de mama. Para lograr estos efectos se necesitan altas dosis de D, lo que genera hipercalcemia como efecto secundario. En nuestro laboratorio se demostró que BSO (L-butionina-S,R-sulfoximina), droga que inhibe la síntesis de glutatión (GSH), potencia el efecto antiproliferativo de D tanto en células que expresan receptor de estrógenos (MCF-7) como en células de cáncer de mama triple negativas (HMLER), es decir carentes de receptores de estrógenos, de progesterona y del factor de crecimiento epidérmico (HER-2). También observamosquemenadiona (MEN) o vitamina K3,droga que depleciona los niveles de GSH, potencia la disminución de la proliferación celular producida por D en células de cáncer de mama MCF-7, aunque su mecanismo no está del todo claro. Además, en un estudiorealizado in vivo, demostramos que la combinación de D y MEN disminuye el tamaño tumoral en ratones CBi-IGEinoculados con un tumor triple negativo (M-406). El objetivo del presente trabajo fue continuar el estudio de los mecanismos moleculares involucrados en el efecto antiproliferativo decalcitriol combinado con MEN en las células de cáncer de mama. Materiales yMétodos:Para ello, las células MCF-7 fueron tratadas durante 96 horas con D 100 nM, MEN 10 μM, ambas drogas o su vehículo (etanol). La proliferación celular se determinó por la técnica de violeta cristal. El potencial de membrana mitocondrial y el ciclo celular se evaluaron por citometría de flujo. Por espectrofotometría se midieron los niveles de anión superóxido(O2-.) y óxido nítrico (NO). La formación de organelas vesiculares ácidas (OVAs) se evaluó por microscopía de fluorescencia. El análisis estadístico se realizó mediante ANOVA seguido por el test de Bonferroni.Resultados:Se observódisminución en la viabilidad de las células MCF-7 tratadas con MEN, D y MEN+D, siendo significativamente mayor el efecto del tratamiento combinado en comparación con los tratamientos individuales. Tanto D como MEN+D indujeron arresto del ciclo celular en la fase G0/G1, incremento en el porcentaje de células con el potencial de membrana mitocondrial disminuido y aumento en la producción de NO. El aumento en la producción deO2-.fue mayor con la combinación de MEN+D. Con respecto a las OVAs, se observóincremento en aquellas células tratadas con MEN, D y ambas drogas simultáneamente, siendo el efecto mayor con el tratamiento combinado. En conclusión, MEN incrementaría el efecto antiproliferativo de D sobre las células MCF-7 mediante arresto del ciclo celular, aumento del estrés oxidativo y nitrosativo, alteración de la permeabilidad mitocondrial e inducción de autofagia.