Glutamina protege las vías transcelular y paracelular de la absorción intestinal de calcio en condiciones oxidantes

MOINE L; DIAZ DE BARBOZA, G; PEREZ A; MALDONADO C; TOLOSA DE TALAMONI N

Buenos Aires

Congreso; XXXIV Reunión de AAOMM; 2017

AAOMM

El ión Ca+2 se absorbe en elintestino por vía transcelular y paracelular. En el pasaje transcelular, el Ca2+entra al enterocito por los canales TRPV6, se une a calbindina D (CB-D) y salehacia el intersticio a través de la  Ca+2ATPasa y del intercambiador Na+/Ca+2.Por vía paracelular, el Ca+2 atraviesa diferentes estructurasproteicas que regulan su pasaje a través del espacio intercelular, entre ellaslas proteínas claudinas (Cld) 2 y 12. En un trabajo anterior se demostró que menadiona(MEN), droga pro-oxidante de uso clínico, inhibe la absorción intestinal globalde Ca+2 por desencadenamiento de estrés oxidativo y apoptosis de losenterocitos, efectos que son bloqueados por la administración previa de Glutamina(GLN). El propósito de este trabajo fue dilucidar si los efectos de MEN y/o GLNse producían en la vía transcelular o paracelular o en ambas vías. Para ello, pollosde 4 semanas recibieron los siguientes tratamientos: MEN (2,5 µmoles/kg pesocorporal por vía i.p., 30 min.), GLN (0,5g/kg peso corporal por vía oral, 30min), GLN+MEN (GLN se administró 30 min antes de MEN) o vehículo en los controles.La absorción intestinal de Ca+2 se evaluó por la técnica del asaintestinal ligada in situ, enpresencia y ausencia de rojo de rutenio (RR 20 µM), inhibidor del TRPV6 quebloquea la vía transcelular. Se analizó la ultraestructura del epiteliointestinal por microscopía electrónica (ME). Laexpresión de las proteínas (CB-D, Ca+2ATPasa y Cld2) se evaluó por western blot. Los resultados revelaronque en los animales controles el 60% del Ca+2 es absorbido por vía paracelular y el 40% por vía transcelular,ya que en presencia de RR se absorbe un 40% menos que en ausencia delinhibidor. MEN disminuyó un 45% la absorción total de Ca+2 enrelación con el control (MEN: 1,38±0,08 vsC: 2,55±0,08 nmoles de Ca+2 /mL de plasma, p <0,001), afectandoambas vías puesto que en presencia de MEN y de RR se produjo una inhibición 25%mayor a la producida por MEN sola (MEN: 1,39±0,08 vs MEN+RR: 1,04±0,19 nmoles de Ca+2/mL de plasma). GLNfavoreció la absorción por la vía transcelular ya que el 67% del Ca+2se absorbió por esta vía (GLN: 2,85±0,20 vs GLN+RR: 0,96±0,04 nmoles de Ca+2/mLde plasma, p < 0,001). La administración de GLN previa a MEN evitó elbloqueo de la vía transcelular ocasionado por la quinona, a juzgar por losresultados con RR que demostraron retorno a los valores controles (GLN+MEN:2,49±0,09 vs GLN+MEN+RR: 1,66±0.08 nmolesde Ca+2/mL de plasma, p < 0,001). Las imágenes de ME revelaron queMEN produjo alteraciones en los enterocitos y en las uniones intercelulares,entre ellos disminución del tamaño de las microvellosidades de los enterocitosy apertura del espacio intercelular, especialmente a nivel de las unionesadherentes, efectos que se previnieron con la administración de GLN. De por sí,GLN no afectó la ultraestructura del epitelio intestinal.  Además, MEN disminuyó la expresión proteica deCB-D, Ca+2ATPasa y Cld2,  locual se evitó con la administración de GLN. En conclusión, MEN afecta lafuncionalidad de ambas vías de la absorción intestinal de Ca+2,inhibiendo la expresión de proteínas claves de cada vía y alterando laultraestructura de los enterocitos y de sus uniones intercelulares. Eltratamiento con GLN podría ser una herramienta de uso clínico para prevenir ladisminución de la absorción intestinal de Ca+2 ya que dichoaminoácido bloquea los efectos deletéreos de la quinona.