Efecto de la infusión intramamaria de un modificador de la respuesta biológica a los 14 y 21 días de la involución en la glándula mamaria bovina.

HEFFEL S, RUFFINO V, LORENTE JA, CALVINHO L, DALLARD B.

Santa Fe, Argentina

Otro; VIII Encuentro de Jóvenes Investigadores de la UNL.; 2004

Secretaría de Ciencia y Técnica. Universidad Nacional del Litoral. Federación Universitaria del Litoral

Introducción: La involución normal de la glándula mamaria bovina en la etapa de vaca seca es de fundamental importancia para asegurar una máxima producción de leche durante la lactancia siguiente. La involución normal de la glándula mamaria bovina en la etapa de vaca seca es de fundamental importancia para asegurar una máxima producción de leche durante la lactancia siguiente. Tradicionalmente, el control de las infecciones intramamarias (IIM) durante el período de vaca seca se realiza con antibióticos de acción prolongada. Las limitantes de esta práctica determinan la necesidad de explorar potenciales medidas de control que impliquen la manipulación del sistema inmune de la glándula mamaria bovina. Los modificadores de la respuesta biológica (MRB) o compuestos inmunomoduladores se han utilizado individualmente para potenciar regímenes de terapia antibiótica o de inmunización específica (vacunas), y pueden convertirse en una alternativa eficaz a los métodos tradicionales de control de las enfermedades. Dentro de este contexto, los objetivos del presente trabajo fueron: a) Caracterizar y cuantificar células infiltrantes empleando técnicas histoquímicas en glándulas mamarias libres de infección o infectadas con Staphylococcus aureus tratadas con un agente inmunomodulador intramamario en el momento de interrupción de la lactancia. b) Comparar la involución mamaria de los diferentes grupos experimentales empleando análisis histomorfométricos. Materiales y Métodos: Materiales y Métodos: Se utilizaron seis vacas Holstein no preñadas al final de la lactancia. Después del último ordeño se administró vía intramamaria un MRB a base de LPS en un cuarto mamario, mientras que en otro cuarto se infundió un placebo como control. La infección de los cuartos mamarios con S. aureus se consideró como covariable.  La obtención de las muestras de tejido glandular se realizó en un matadero local a los 14 y 21 días de la interrupción de la lactancia. Se utilizaron seis vacas Holstein no preñadas al final de la lactancia. Después del último ordeño se administró vía intramamaria un MRB a base de LPS en un cuarto mamario, mientras que en otro cuarto se infundió un placebo como control. La infección de los cuartos mamarios con S. aureus se consideró como covariable.  La obtención de las muestras de tejido glandular se realizó en un matadero local a los 14 y 21 días de la interrupción de la lactancia. El MRB utilizado contiene lipopolisacárido proveniente de una cepa no patógena de Escherichia coli, 45 mg/100 ml de fracciones membranosas y ribosomales de la misma cepa, expresadas al 50% de ácido ribonucleico, liposomas y agentes de formulación.  La concentración de LPS, expresada en  microgramos de KDO, fue de 0,35 en un volumen total de 10 ml de vehículo. Se tomaron 2 muestras de cada cuarto mamario y se fijaron en formol bufferado 10% según protocolos histológicos de rutina. Para la identificación de mastocitos se empleó la coloración de Azul de Toluidina y para la detección específica de eosinófilos la coloración de Rojo Sirius en solución alcalina (pH 10.5). Las imágenes generadas con un microscopio Olympus BH2, fueron digitalizadas mediante una cámara Sony Ccd-iris conectada a una PC de escritorio. La evaluación histomorfométrica se realizó con un analizador digital de imágenes (Image Pro-Plus 4.1.0.1®.). Para medir infiltración celular se calculó la cantidad de células por unidad de área. Se calculó la relación parénquima/estroma de todos los grupos experimentales y el área ocupada por estroma se expresó en porcentaje. Resultados y Conclusiones: Resultados y Conclusiones: El número promedio de las diferentes células / mm2 y los resultados del análisis morfométrico se expresan en la Tabla 1 para todos los grupos experimentales estudiados. El número promedio de las diferentes células / mm2 y los resultados del análisis morfométrico se expresan en la Tabla 1 para todos los grupos experimentales estudiados. El mayor número de mastocitos / mm2 se observó en los cuartos de animales no infectados con S. aureus que fueron inoculados con placebo y en los que fueron tratados con LPS en los dos períodos estudiados. El mayor número de eosinófilos / mm2 tanto en el intersticio como en el interior de los alvéolos, se observó en los cuartos de animales infectados y no infectados con S. aureus que fueron tratados con placebo en los dos períodos evaluados. El análisis morfométrico reveló que en los diferentes grupos estudiados los porcentajes de área ocupada por estroma fueron similares, por lo que la infusión intramamaria de un MRB o la infección con S. aureus no afectarían el proceso de involución.  Tabla 1: Número promedio de mastocitos y eosinófilos / mm2  y área ocupada por estroma (%) a los 14 y 21 días de la involución mamaria bovina.  Tabla 1: Número promedio de mastocitos y eosinófilos / mm2  y área ocupada por estroma (%) a los 14 y 21 días de la involución mamaria bovina. 14 días 21 días Grupos experimentales M EI EA AE M EI EA AE Tratados (-) 1 76.25 2.75 11.71 72.70 77.85 18.46 9.07 72.76 Tratados (+) 2 30.5 3.27 10.45 71.32 60.20 5.06 17.53 63.47 Placebo (-) 3 79.46 27.05 34.84 62.80 101.13 31.69 42.99 67.67 Placebo (+) 4 59.39 12.08 47.83 58.86 48.15 8.49 5.30 65.53 M (mastocitos), EI (eosinófilos en el intersticio), EA (eosinófilos en la luz alveolar), AE (porcentaje de área ocupada por estroma). (1) Cuartos mamarios no infectados con S. aureus tratados con LPS. (2) Cuartos mamarios con infección por S. aureus  tratados con LPS. (3) Cuartos mamarios tratados con placebo no infectados con S. aureus. (4) Cuartos mamarios tratados con placebo con infección por S. aureus. M (mastocitos), EI (eosinófilos en el intersticio), EA (eosinófilos en la luz alveolar), AE (porcentaje de área ocupada por estroma). (1) Cuartos mamarios no infectados con S. aureus tratados con LPS. (2) Cuartos mamarios con infección por S. aureus  tratados con LPS. (3) Cuartos mamarios tratados con placebo no infectados con S. aureus. (4) Cuartos mamarios tratados con placebo con infección por S. aureus.