Erradiación de biofilm bacteriano mediante Terapia Fotodinámica Antibacteriana (PACT).

SILVERO JAZMÍN; AIASSA VIRGINIA; ROCCA DIAMELA; BECERRA MARÍA CECILIA

Bariloche

Otro; IV Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos; 2018

Grupo Argentino de Fotobiología

Los biofilms bacterianos son una de las causas de resistencia a antibióticos de uso clínico y de persistencia de numerosas infecciones, presentando hasta 1000 veces más resistencia que las bacterias en estado planctónico. Debido a esto la búsqueda de nuevos compuestos antibacterianos es de suma importancia, en especial aquellos capaces de erradicar biofilms preformados. En este trabajo se sintetizaron nanopartículas de oro conjugadas con amoxicilina (amoxi@AuNP) [1] y fueron empleadas como fotosensibilizadores en terapia fotodinámica antibacteriana (PACT) para la erradicación de biofilms de cepas clínicas de Staphylococcus aureus meticilino resistente (SAMR) y Pseudomonas aeruginosa (PAE).La biomasa del biofilm se cuantificó en las cepas clínicas de SAMR 771 y 773 y en las cepas clínicas de PAE 191150 y 189718, mediante el ensayo de tinción con cristal violeta. La actividad metabólica fue determinada mediante el ensayo colorimétrico de reducción del reactivo XTT, luego de 1 y 3 horas de PACT excitando el plasmón de las Amoxi@AuNP de concentración 1,5 µg/mL con luz blanca proveniente de un panel de LEDs. Mediante microscopia electrónica de barrido (SEM) se evaluó la erradicación de biofilm.Todas las cepas fueron formadoras de biofilms, observándose la mayor producción de biomasa en la cepa PAE 191150 (DO595nm = 4,38 ± 0,21), Se obtuvo una marcada reducción de la actividad metabólica bajo irradiación de las muestras tratadas con Amoxi@AuNP. En las muestras de SAMR 771 y 773 irradiadas durante 3 horas, la actividad metabólica se redujo un 59% y 54% respectivamente, con respecto a sus controles tratados con PBS. En las cepas clínicas PAE 191150 y 189718, la reducción fue de 69% y 71% respecto a las muestras control. Por otro lado, las Amoxi@AuNP que no fueron irradiadas, no produjeron un cambio significativo en el metabolismo celular. Cabe destacar que la viabilidad del biofilm se mantuvo a lo largo del experimento aún en las muestras que fueron irradiadas sin fotosensibilizador, demostrando que la luz por sí sola no es suficiente para provocar la muerte celular. Los resultados obtenidos se corroboraron mediante imágenes SEM de las cepas SAMR 771 y PAE 191150 irradiadas durante 3 horas con Amoxi@AuNP.En base a estos resultados, se concluye que las Amoxi@AuNP poseen un alto potencial como fotosensibilizadores para la PACT, constituyendo una alternativa terapéutica para el tratamiento de infecciones provocadas por bacterias resistentes a antibióticos, pero aún es necesario profundizar acerca del mecanismo de acción y evaluar su efecto en otras cepas bacterianas resistentes.Referencia:1- Silvero MJ., Rocca DM., Artur de la Villarmois E., Fournier K., Lanterna AE., Pérez MF., Becerra MC.,Scaiano JC. ACS Omega. Open Access., 3, 1220, 2018.