Inactivación fotodinámica de una cepa clínica de Staphylococcus aureus por acción de nuevas antraquinonas naturales.

PAEZ PAULINA; CABRERA JOSE LUIS; NUÑEZ MONTOYA SUSANA; DIMMER JESICA; MENDOZA CATERINE SONIA

San Miguel de Tucuman

Otro; III Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos; 2016

Grupo Argentino de Fotobiología

El problema generalizado de la resistencia a los antibióticos por patógenos, tales como Staphylococcus aureus meticilino resistente, ha impulsado la búsqueda de nuevos enfoques para tratamientos antimicrobianos. La terapia fotodinámica antimicrobiana (TFDA) se está estudiando como una posible alternativa para tratar infecciones localizadas1. La misma se puede definir como la erradicación de las células target, debido a la generación de especies reactivas de oxígeno (ERO), producidas por la interacción de un fotosensibilizador y la luz de longitud de onda apropiada2. Recientemente, a partir de la especie Heterophyllaea lycioides (Rusby) Sandwith (Rubiaceae) se aislaron tres nuevas antraquinonas (AQs): Lycionina (Lyc), 5-clorosoranjidiol (5-Clsor) y 7-clorobisoranjidiol (7-Clbis)3,4. Mediante estudios fotofísicos y fotobiológicos, demostramos que son agentes fotosensibilizantes, ya que en presencia de luz involucran la producción de ERO5,6.El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antibacteriana de estas AQs aisladas de H. lycioides, mediante el mecanismo de inactivación fotodinámica.Se determinó la CIM y CBM de las tres AQs sobre una cepa clínica de S. aureus, empleando el método de microdilución en caldo según las normas del CLSI5. Para realizar el tratamiento de irradiación, cada AQ fue incubada a su CIM (n=16) con una suspensión de S. aureus durante 1 h. La mitad de las muestras (n=8) se irradiaron con una lámpara actínica (λmáx.= 420 nm - 0.65 mW/cm2) durante 15 min (t=1). La irradiación se repitió luego de 2 (t=2), 4 (t=3) y 6 h (t=4) de incubación. La otra mitad de las muestras se mantuvieron en oscuridad (n=8). A continuación de cada irradiación, se tomaron muestras por duplicado de ambas condiciones experimentales (luz y oscuridad) para realizar el recuento de bacterias y determinar la producción de ERO mediante el ensayo de NBT. Se incluyeron controles de inóculo y medio de cultivo por duplicado en oscuridad y bajo acción de la luz.En condiciones normales de laboratorio, Lyc presentó los valores más bajos de CIM y CBM: 31,25 µg/mL y 62,5 µg/mL respectivamente; seguida por 5-Clsor con una CIM de 62,5 µg/mL y una CBM de 125 µg/mL y por último 7-Clbisor presentó una CIM de 125 µg/mL y una CBM de 250 µg/mL.Durante el tratamiento de irradiación, el efecto bactericida de Lyc y 7-Clsor no fue fotoestimulado respecto al observado en oscuridad. En cambio, 5-ClSor al finalizar el tratamiento de irradiación (t=4) logró una reducción de dos logaritmos en las UFC/mL respecto del tratamiento en oscuridad (Rto. en luz: 6x104 UFC/mL; Rto. en osc: 4,4x106 UFC/mL). Este efecto puede explicarse por un incremento en la producción de ERO, de aproximadamente 487 veces respecto de t=1. Cabe destacar que el desarrollo del microorganismo no fue afectado por la acción de la luz actínica. Según los resultados obtenidos, podemos concluir que Lyc es el compuesto más activo bajo condiciones de normas CLSI, pero no pudo ser fotoactivado en las condiciones de irradiación ensayadas. Sin embargo, el efecto antibacteriano de 5-Clsor fue incrementado al ser irradiado; por lo que esta nueva AQ nos motiva a nuevos estudios, a fin de evaluar su potencial aplicación en TFDA.