Aislamiento, identificación y selección de levaduras biocontroladoras de Alternaria alternata en uvas Malbec de la DOC San Rafael.

LUCIANA P. PRENDES; MARIA GABRIELA MERIN; MARIO A. ANDREONI; VILMA I. MORATA DE AMBROSINI

Santa Fe

Jornada; XVI Jornadas Argentinas de Microbiología y III Congreso Bioquímico del Litoral; 2015

Asociación Argentina de Microbiologia

Aislamiento, identificación y selección de levadurasbiocontroladoras de Alternaria alternata en uvas Malbec de la DOC San Rafael.Area: Microbiología industrial y biotecnología Email de contacto: lpprendes@fcai.uncu.edu.arPrendes LP 1,   Merín MG 1,   Andreoni MA 2,   Morata VI 1,   1 Laboratorio de Biotecnología, Facultad de Ciencias Aplicadas a la Industria, Universidad Nacional de Cuyo, Bernardo de Irigoyen 375, San Rafael (5600), Mendoza, Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).s ,  2 Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA), Rama Caída S/N, San Rafael (5600), Mendoza, Argentina., Argentina se encuentra en el quinto puesto de los paísesproductores de vino y el área de DOC ?San Rafael? es una bien reconocida regiónvitivinícola. Entre los hongos filamentosos mayoritarios presentes en uvas paravinificar se encuentra el género Alternaria, uno de los más micotoxigénicos,representando un gran riesgo para la salud del consumidor de vino. Como estrategiapreventiva, el control biológico con levaduras propias del ecosistema puede serparticularmente prometedor.Por todo lo expuesto, fueron objetivos del presente trabajo: 1- aislar eidentificar levaduras provenientes de uvas para vinificar y 2- evaluar sucapacidad biocontroladora en uva contra 3 cepas de Alternaria alternatapreviamente seleccionadas de uvas Malbec altamente toxicogénicas y patogénicas.El aislamiento de levaduras se realizó a partir de uvas Malbec vendimias 2011,2012 y 2013, mediante la técnica de plaqueo directo en medioDicloran-Cloranfenicol-Rosa de bengala Agar e incubación a 25 ºC por 7 días. Laidentificación se realizó mediante el análisis de polimorfismo del amplificadode la región génica ITS1-5.8S-ITS2 y sus productos derivados de la restricción(ITS-RFLP). Para evaluar la capacidad biocontroladora de las levaduras, enprimer lugar se determinó para cada cepa de A. alternata la concentraciónmínima de esporas necesaria para infectar el 100% de las uvas (ConcentraciónMínima Infectiva). Brevemente, se tomaron uvas Malbec y se las inoculó con unasuspensión de conidios a la concentración a evaluar y se incubaron en placas dePetri a 25 ºCen estufa con ciclo luz: oscuridad (8:16) y humedad relativa de 100%. Seutilizaron 3 placas con 8 uvas por placa por condición a evaluar y serealizaron 2 experimentos independientes. Entonces, se evaluó el posible efectopreventivo de cada una de las levaduras inoculando una suspensión de 106células/ml de cada levadura a probar 2 horas antes a la inoculación delpatógeno a su CMI. Los datos de porcentaje de uvas infectadas fueron analizadosestadísticamente utilizando el software Infostat (versión 2013).Como resultado, de las 72 cepas de levadura aisladas, el 69,4% fue identificadocomo Aureobasidium pullulans, el 11,1% como Hanseniospora uvarum, el 8,3% comoMetschnikowia pulcherrima, el 4,1 % como Criptococcus laurentti II, el 4,2 %como Cándida spp. y 1,4 % Rodothorula spp., quedando 1,4% sin identificar.Tomando como criterio una reducción a un máximo de 40% en el porcentaje deinfección de cada una de las 3 cepas de A. alternata a su CMI en cada uno delos 2 experimentos realizados, 30 de las 72 levaduras evaluadas (41,7%)resultaron biocontroladoras. El 26% de las A. pullulans probadas fueronbiocontroladoras mientras que todas las cepas de Hanseniospora uvarum,Metschnikowia pulcherrima y Cándida spp. lo fueron. Entre las biocontroladoras,el 40% logró reducir el porcentaje de infección a 0.0±0.0 % de cada una de las3 cepas.Como conclusión, un gran porcentaje de las cepas de levadura aisladas de uvasMalbec resultaron buenas biocontroladoras para A. alternata, sugiriendo quesería posible utilizarlas como un método efectivo de control biológico en uvapara vinificar.